2 0 2 5 0 1 0 9 发 布 － － 2 0 2 5 0 5 0 1 － － 实 施 小 麦 茎 基 腐 病 抗 性 鉴 定 技 术 规 程 0 4 中 华 人 民 共 和 国 农 业 行 业 标 准 备 案 号 ： X X X X - X X X X Ｉ Ｃ Ｓ 6 5 . 0 2 0 . 0 1 C C S B 4 4 6 3 — 2 0 2 5 T e c h n i q u a l c o d e o f p r a c t i c e f o r r e s i s t a n c e e v a l u a t i o n o f w h e a t t o f u s a r i u m c r o w n r o t Ｎ Ｙ ／ Ｔ 中 华 人 民 共 和 国 农 业 农 村 部 发 布NY/T４４６３—２０２５ 前　　言 本文件按照GB/T１􀆰１—２０２０«标准化工作导则　第１部分:标准化文件的结构和起草规则»的规定 起草. 请注意本文件的某些内容可能涉及专利.本文件的发布机构不承担识别专利的责任. 本文件由农业农村部种植业管理司提出并归口. 本文件起草单位:中国农业科学院植物保护研究所. 本文件主要起草人:刘太国、张昊、刘博、高利、陈万权. ⅠNY/T４４６３—２０２５ 小麦茎基腐病抗性鉴定技术规程 １　１　范围 本文件规定了小麦茎基腐病抗性鉴定的鉴定程序、病原物接种体、苗期抗性接种、成株期抗性鉴定、抗 性综合评价. 本文件适用于普通小麦(包括选育品种/系、地方品种、特殊遗传材料、近等基因系、重组自交系、DH群 体)、杂交小麦、其他栽培小麦种、野生小麦、小麦野生近缘种对小麦茎基腐病抗性的室内和田间鉴定和评价. ２　规范性引用文件 本文件没有规范性引用文件. ３　术语和定义 下列术语和定义适用于本文件. ３􀆰１ 小麦茎基腐病　wheatcrownrot 由假禾谷镰孢FusariumpseudograminearumO’Donnell&Aoki等侵染茎基部所导致的小麦病害, 可引起小麦茎基部坏死、植株枯萎和枯白穗(学名和形态描述见附录A中A􀆰１). ４　鉴定程序 小麦茎基腐病抗性鉴定程序包括接种体制备、鉴定选择、接种方法、严重度记载及标准、苗期或成株期 抗性评价和抗性评价阶段.程序流程如图１所示. ５　病原物接种体 ５􀆰１　接种菌株的分离 从发病小麦茎基部发病部位,切取病组织,用７０％的乙醇表面消毒３０s,１％次氯酸钠溶液消毒１ min,置马铃薯葡萄糖琼脂(potatodextroseagar,PDA)２５℃黑暗条件下培养３d~５d后,将类似镰刀菌 属真菌挑出,放到新鲜的PDA培养上,通过单菌丝纯化分离得到目标菌株.通过分离物纯化、形态学及 分子生物学鉴定、致病性测定,筛选强致病力菌株,０℃~４℃冷藏保存备用. ５􀆰２　接种体制备 接种所用分离物应为致病力强的分离物.接种体分为麦粒接种体和分生孢子接种体２种.麦粒接种 体制备见A􀆰２􀆰１,分生孢子接种体制备见A􀆰２􀆰２. ６　苗期抗病性鉴定 ６􀆰１　接种方法 鉴定试验设３次~４次重复,每个处理１５株.中抗对照品种如Sunco,感病对照品种如Kennedy. ６􀆰１􀆰１　浸泡法 小麦种子发芽后胚芽鞘长至０􀆰５cm时,将胚芽鞘长度一致的萌发种子置于小麦茎基腐病菌孢子悬浮 液中浸泡１min后播种于盛有灭菌营养土的幼苗钵内.接种后幼苗置于生长室中１００％相对湿度下黑暗 培养４８h,需经过(２５±３)℃/(１５±３)℃(１４h/１０h)２个循环.取出幼苗,置于相同温度条件、１４h光周期 下培养,相对湿度６５％/８５％(±５％)、光照度５００μmol/(m２􀅰s),培养过程中幼苗萎蔫时少量补水,保 持水胁迫,３５d后调查. ６􀆰１􀆰２　湿巾法 小麦种子发芽后胚芽鞘长至０􀆰５cm~２􀆰０cm时,将萌发的种子置于小麦茎基腐病菌孢子悬浮液中 １NY/T４４６３—２０２５ 图１　小麦茎基腐病抗性鉴定程序流程 浸泡１min后,选择１５粒萌发的种子整齐排成一行,播种于湿纸巾(２３􀆰５cm×１０􀆰５cm)上,卷成纸卷,保 持吸足水分４８h,置于２５℃、相对湿度６５％条件下培养,小麦幼苗表现萎蔫时将纸卷置于水中３０s, ７d~１４d时即可调查. ６􀆰２　严重度记载及标准 ６􀆰２􀆰１　调查方法 根据病害症状描述,调查和记载每个幼苗的严重度. ６􀆰２􀆰２　病情分级 病情严重度分级及其对应的症状描述见表１. ２NY/T４４６３—２０２５ 表１　小麦茎基腐病苗期严重度分级及其症状描述 严重度分级 症　状　描　述 ０ 　无明显症状 １ 　胚芽鞘或第１叶鞘上有明显的坏死斑 ２ 　第１叶鞘及地下茎部分坏死 ３ 　第２叶鞘和地下茎完全坏死、伴有清晰缩短,不超过植株或幼苗高度的１/２ ４ 　第３叶或叶鞘及地下茎部分或完全坏死,伴有严重缩短超过植株或幼苗高度的１/２ ５ 　整个植株严重坏死至完全坏死 ６􀆰２􀆰３　发病率和病情指数的计算与记载 根据６􀆰２􀆰２描述的分级标准记载病情,按公式(１)计算病情指数(DI). 式中: DI＝∑(s×n) N×S×１００ (１) DI———病情指数; s———各病情级别的代表数值; n———各病情级别有植株(叶片)数,单位为株(片); N———调查总株(叶片)数,单位为株(片); S———最高级病情级别的代表数值. ６􀆰３　苗期抗性评价 小麦茎基腐病苗期抗性评价标准见表２. 表２　小麦茎基腐病苗期抗性评价标准 病情指数 抗性评价 DI＝０ 　免疫(Immune,I) ０＜DI≤１０ 　抗病(Resistant,R) １０＜DI≤２０ 　中抗(Moderatelyresistant,MR) ２０＜DI≤３０ 　中感(Moderatelysusceptible,MS) DI＞３０ 　高感(Highlysusceptible,HS) ７　成株期抗性鉴定 ７􀆰１　鉴定圃选址 鉴定圃应设置在小麦茎基腐病适发区,选择具备良好的自然发病环境和灌溉条件、地势平坦、土壤肥 沃的地块.鉴定圃内不施用任何杀菌剂. ７􀆰２　鉴定对照品种 中抗对照品种如Sunco,感病对照品种如矮抗５８. ７􀆰３　种植要求 播种时间、土壤肥力水平和耕作管理与大田生产相同. ７􀆰４　接种方法 ７􀆰４􀆰１　混播法 将麦粒接种体与待测小麦种子１∶２混匀,出苗后注意保持水分胁迫,植株萎蔫时补充水分.鉴定材 料可采用穴播或条播,每穴播种１０粒~１５粒待测小麦种子,穴距２５cm或每１􀆰５m行长播种３０粒种子, 行距２５cm~３０cm. ７􀆰４􀆰２　套管法 鉴定材料采用穴播,穴距２５cm,行距２５cm~３０cm,每５０份~１００份鉴定材料设１组中抗和感病对 照品种材料.每份鉴定材料种植１穴１.小麦返青时,将麦粒接种体均匀撒于每穴小麦中间,抖动小麦植 ３NY/T４４６３—２０２５ 株,使麦粒接种体落至茎基部,并套PVC材料圆管(直径１１cm,高１０cm)保持田间植株茎部湿度,每穴接 种麦粒接种体２０粒~３０粒.接种后,覆膜保持田间相对湿度１００％,４８h后揭去塑料薄膜,注意保持水分 胁迫,植株萎蔫时补充水分. ７􀆰５　小麦茎基腐病成株期严重度记载及标准 ７􀆰５􀆰１　调查方法 ７􀆰５􀆰１􀆰１　穴播调查方法:调查每穴全部植株.调查时间为灌浆后期,根据病害症状描述,调查和记载每株 (含分蘖)的严重度. ７􀆰５􀆰１􀆰２　条播调查方法:成株期每个品种每个重复调查３０茎.调查时间为灌浆后期,根据病害症状描 述,调查和记载每株(含分蘖)的严重度. ７􀆰５􀆰２　病情分级 小麦茎基腐病成株期严重度分级及其症状描述见表３. 表３　小麦茎基腐病成株期严重度分级及其症状描述 严重度分级 症　状　描　述 ０ 　无症状 １ 　第１节间部分褐枯 ２ 　第１节间完全褐枯或第１节和第２节间的茎节明显病变 ３ 　第１节间完全褐枯,第２节间部分褐枯 ４ 　第１节间和第２节间完全褐枯或第２节和第３节间的茎节明显病变 ５ 　第１节间和第２节间完全褐枯或第２节和第３节间的茎节明显病变,第３节间部分褐枯 ６ 　第１、２、３节间完全褐枯 ７􀆰５􀆰３　发病率和病情指数的计算与记载 根据６􀆰２􀆰２描述的分级标准记载病情,按公式(１)计算病情指数(DI). ７􀆰６　成株期抗性评价 当鉴定圃感病对照材料达到其相应感病程度,该批次抗茎基腐鉴定视为有效.依据鉴定材料的病情 指数DI确定其对茎基腐病的抗性水平,划分标准见表４. 表４　小麦对茎基腐病成株期抗性评价标准 病情指数 抗性评价 DI＝０ 免疫(I) ０＜DI≤１０ 抗病(R) １０＜DI≤２０ 中抗(MR) ２０＜DI≤３０ 中感(MS) ３０＜DI≤４０ 感病(S) DI＞４０ 高感(HS) ８　抗性评价 ８􀆰１　抗性水平确定 依据鉴定材料苗期和成株期发病程度综合确定其对茎基腐病的抗性水平,通常以最高级别(病情指数 DI)为准. ８􀆰２　重复鉴定 初次鉴定表现为抗、中抗的材料,翌年用相同的病原菌进行重复鉴定.当２年抗性鉴定结果不一致 时,以记载的最高病情级别(病情指数DI)为准. ８􀆰３　鉴定记载表格 小麦茎基腐病抗性鉴定原始记录及结果记载表见表５. ４NY/T４４６３—２０２５ 表５　 年小麦茎基腐病抗性鉴定原始记录及结果记载表 编 号品种 名称来源苗期接种 病情严重度 ０级１级２级３级４级５级茎腐 指数 DI抗性 评价成株期接种 病情严重度 ０级１级２级３级４级５级６级茎腐 指数 DI抗性 评价抗性 总评 　　注１:鉴定地点 　地势 注２:接种病原菌分离物编号 注３:接种日期 　调查日期 注４: