2 0 2 3 0 4 1 1 发 布 － － 2 0 2 3 0 8 0 1 － － 实 施 饲 料 中 1 6 种 多 环 芳 烃 的 测 定 气 相 色 谱 - 质 谱 法 4 6 中 华 人 民 共 和 国 农 业 行 业 标 准 备 案 号 ： X X X X - X X X X Ｉ Ｃ Ｓ 6 5 . 1 2 0 C C S B 4 3 5 9 — 2 0 2 3 D e t e r m i n a t i o n o f s i x t e e n p o l y c y c l i c a r o m a t i c h y d r o c a r b o n s i n f e e d s — G a s c h r o m a t o g r a p h y m a s s s p e c t r o m e t r y （ G C - M S ） Ｎ Ｙ ／ Ｔ 中 华 人 民 共 和 国 农 业 农 村 部 发 布NY/T４３５９—２０２３ 前　　言 本文件按照GB/T１􀆰１—２０２０«标准化工作导则　第１部分:标准化文件的结构和起草规则»的规定 起草. 请注意本文件的某些内容可能涉及专利.本文件的发布机构不承担识别专利的责任. 本文件由农业农村部畜牧兽医局提出. 本文件由全国饲料工业标准化技术委员会(SAC/TC７６)归口. 本文件起草单位:通威股份有限公司、四川威尔检测技术股份有限公司. 本文件主要起草人:杜雪莉、张凤枰、张艳红、李德祥、杨发树. ⅠNY/T４３５９—２０２３ 饲料中１６种多环芳烃的测定　气相色谱Ｇ质谱法 １　范围 本文件描述了饲料中１６种多环芳烃的气相色谱Ｇ质谱测定方法. 本文件适用于配合饲料、浓缩饲料、精料补充料、添加剂预混合饲料和饲料原料中萘、苊烯、苊、芴、菲、 蒽、荧蒽、芘、苯并(a)蒽、 、苯并(b)荧蒽、苯并(k)荧蒽、苯并(a)芘、茚并(１,２,３Ｇc,d)芘、二苯并(a,h)蒽、 苯并(g,h,i)苝等１６种多环芳烃的测定. 本文件的检出限和定量限应符合附录A的规定. ２　规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中,注日期的引用文件,仅 该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件. GB/T６６８２　分析实验室用水规格和试验方法 GB/T２０１９５　动物饲料　试样的制备 ３　术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义. ４　原理 试样中的多环芳烃经正己烷超声提取,用凝胶渗透色谱仪净化,气相色谱Ｇ质谱仪测定,内标法定量. ５　试剂或材料 警告———多环芳烃是已知的致癌、致畸、致突变的物质.操作应在通风柜中进行并戴防护手套,减少 暴露,注意安全防护. 除另有规定外,所用试剂均为分析纯. ５􀆰１　水:GB/T６６８２,一级. ５􀆰２　乙酸乙酯:色谱纯. ５􀆰３　环己烷:色谱纯. ５􀆰４　正己烷:色谱纯. ５􀆰５　正己烷. ５􀆰６　乙腈＋丙酮(５＋５):量取５００mL乙腈、５００mL丙酮,混匀. ５􀆰７　乙酸乙酯＋环己烷(１＋１):量取５００mL乙酸乙酯(５􀆰２)、５００mL环己烷(５􀆰３),混匀. ５􀆰８　凝胶渗透色谱校准标准溶液:含有玉米油(２５mg/mL)、邻苯二甲酸二(２Ｇ乙基己基)酯(１mg/mL) 和甲氧滴滴涕(２００mg/L)、苝(２０mg/L)和硫(８０mg/L)的混合溶液.可直接购买市售有证标准溶液. ５􀆰９　多环芳烃混合标准溶液(２００μg/mL):１６种多环芳烃[萘、苊烯、苊、芴、菲、蒽、荧蒽、芘、苯并(a)蒽、 、苯并(b)荧蒽、苯并(k)荧蒽、苯并(a)芘、茚并(１,２,３Ｇc,d)芘、二苯并(a,h)蒽、苯并(g,h,i)苝]有证混 合标准溶液,浓度均为２００μg/mL,－１８℃以下保存. ５􀆰１０　多环芳烃混合标准中间溶液(２μg/mL):准确移取１mL多环芳烃混合标准溶液(５􀆰９)于１００mL 棕色容量瓶中,用正己烷(５􀆰４)稀释、定容,混匀.－１８℃以下保存,有效期１个月. ５􀆰１１　内标标准溶液(１０００μg/mL):苊ＧD１０、 ＧD１２和苯并(a)芘ＧD１２有证标准溶液,浓度均为１０００μg/ mL,－１８℃以下保存. １NY/T４３５９—２０２３ ５􀆰１２　内标混合中间溶液(１００μg/mL):准确移取１mL内标标准溶液(５􀆰１１)于１０mL棕色容量瓶中,用 正己烷(５􀆰４)稀释、定容,混匀.－１８℃以下保存,有效期１个月. ５􀆰１３　内标混合工作溶液(２μg/mL):准确移取１mL的内标混合中间溶液(５􀆰１２)于５０mL棕色容量瓶 中,用正己烷(５􀆰４)稀释、定容,混匀.临用现配. ５􀆰１４　多环芳烃混合标准系列溶液:准确移取１０μL、２５μL、５０μL、２５０μL、５００μL、１０００μL多环芳烃混 合标准中间溶液(５􀆰１０)于１０mL棕色容量瓶中,分别加入２５０μL内标混合工作溶液(５􀆰１３),用正己烷 (５􀆰４)稀释、定容,混匀.配制成浓度分别为２ng/mL、５ng/mL、１０ng/mL、５０ng/mL、１００ng/mL、 ２００ng/mL多环芳烃混合标准系列溶液.苊ＧD１０、 ＧD１２、苯并(a)芘ＧD１２的浓度均为５０ng/mL.临用 现配. ５􀆰１５　微孔滤膜:０􀆰２２μm,有机系. ６　仪器设备 ６􀆰１　气相色谱Ｇ质谱仪:配有电子轰击(EI)源. ６􀆰２　电子天平:精度０􀆰０１g. ６􀆰３　涡旋混合器. ６􀆰４　超声波清洗器. ６􀆰５　离心机:转速不低于８０００r/min. ６􀆰６　旋转蒸发仪. ６􀆰７　凝胶渗透色谱仪:具２５４nm固定波长紫外检测器,填充凝胶填料的净化柱. ７　样品 按GB/T２０１９５的规定制备样品,至少２００g,粉碎使其全部通过０􀆰４２５mm孔径的分析筛,充分混 匀,装入磨口玻璃瓶中,备用. ８　试验步骤 ８􀆰１　提取 平行做２份试验.称取试样(油脂类饲料原料除外)５g(精确至０􀆰０１g),置于５０mL离心管中,准确 加入５０μL内标混合工作溶液(５􀆰１３)、２０mL正己烷(５􀆰５),涡旋混合１min,超声提取２０min,其间振摇 ２次~３次,于８０００r/min离心５min,将上清液转移至１００mL梨形瓶中,残渣用２０mL正己烷(５􀆰５)重 复提取２次,合并上清液,于４０℃水浴中旋转蒸发浓缩至约１mL,３０℃水浴氮气吹至近干,准确加入 １０mL乙酸乙酯＋环己烷(１＋１)(５􀆰７),涡旋混合１min,作为试样提取溶液,备用. 平行做２份试验.称取５g油脂类饲料原料试样(精确至０􀆰０１g),置于５０mL离心管中,准确加入 ５０μL内标混合工作溶液(５􀆰１３)、２０mL乙腈＋丙酮(５＋５)(５􀆰６),涡旋混合１min,超声提取２０min,于离 心机中以８０００r/min离心５min,将上清液转移至１００mL梨形瓶中,残渣用２０mL乙腈＋丙酮(５＋５) (５􀆰６)重复提取２次,合并上清液,于４０℃水浴中旋转蒸发浓缩至约１mL,３０℃水浴氮吹至近干,准确加 入１０mL乙酸乙酯＋环己烷(１＋１)(５􀆰７),涡旋混合１min,作为试样提取溶液,备用. ８􀆰２　净化 ８􀆰２􀆰１　凝胶渗透色谱柱的校准 按照仪器说明书使用凝胶渗透色谱校准标准溶液(５􀆰８)对凝胶渗透色谱柱进行校准,得到的色谱峰应 满足以下条件:所有峰形均匀对称;玉米油和邻苯二甲酸二(２Ｇ乙基己基)酯的色谱峰之间分辨率大于 ８５％;邻苯二甲酸二(２Ｇ乙基己基)酯和甲氧滴滴涕的色谱峰之间分辨率大于８５％;甲氧滴滴涕和苝的色 谱峰之间分辨率大于８５％;苝和硫的色谱峰不能重叠,基线分离大于９０％. ８􀆰２􀆰２　确定收集时间 ２NY/T４３５９—２０２３ 多环芳烃的初步收集时间限定在玉米油出峰后至硫出峰前,苝洗脱出以后,立即停止收集.然后,用 多环芳烃混合标准中间溶液(５􀆰１０)直接进样获得标准谱图,根据标准谱图确定起始和停止收集时间,测定 其回收率.确定的收集时间应保证目标物回收率≥９０％. ８􀆰２􀆰３　上机净化 试样提取溶液(８􀆰１)由５mL定量环注入凝胶渗透色谱(GPC)柱,泵流速５􀆰０mL/min,用乙酸乙酯＋ 环己烷(１＋１)(５􀆰７)洗脱,根据８􀆰２􀆰２中确定的收集时间,收集流分,将收集液于４０℃水浴中旋转蒸发浓 缩至约１mL,３０℃水浴氮吹至近干,准确加入１mL乙酸乙酯＋环己烷(１＋１)(５􀆰７),涡旋混合１min,过 微孔滤膜(５􀆰１５),备用. 同时做空白试验,除不加试样外,空白试验采用与试样完全相同的分析步骤. ８􀆰３　测定 ８􀆰３􀆰１　气相色谱参考条件 a)　色谱柱:(５％Ｇ苯基)Ｇ甲基聚硅氧烷毛细管柱,长３０m,内径０􀆰２５mm,膜厚０􀆰２５μm,或性能相当者; b)　柱温:初始温度９０℃,以２０℃/min的速率升温至１８０℃,以５℃/min的速率升温至２７０℃,再 以３℃/min的速率升温至３１０℃,保持２min; c)　进样口温度:２６０℃; d)　进样方式:不分流进样; e)　进样量:１􀆰０μL; f)　载气:氦气,纯度≥９９􀆰９９９％; g)　流速:１􀆰０mL/min. ８􀆰３􀆰２　质谱参考条件 a)　电离方式:EI; b)　离子源温度:２３０℃; c)　四级杆温度:１５０℃; d)　传输线温度:３１０℃; e)　电子轰击源:７０eV; f)　测定方式:选择离子扫描模式(SIM); g)　溶剂延迟:３min. 在上述色谱Ｇ质谱条件下,１６种多环芳烃和３种内标的参考保留时间和特征离子见表１. 表１　参考保留时间及