2 0 2 2 1 1 1 1 发 布 － － 2 0 2 3 0 3 0 1 － － 实 施 农 药 登 记 环 境 影 响 试 验 生 物 试 材 培 养 第 4 部 分 ： 家 蚕 1 7 中 华 人 民 共 和 国 农 业 行 业 标 准 备 案 号 ： X X X X - X X X X Ｉ Ｃ Ｓ 6 5 . 0 2 0 C C S B 4 1 9 5 . 4 — 2 0 2 2 G u i d a n c e o n t h e h o u s i n g a n d c a r e o f o r g a n i s m s u s e d f o r e n v i r o n m e n t a l i m p a c t t e s t o f p e s t i c i d e r e g i s t r a t i o n — P a r t 4 : S i l k w o r m ( B o m b y x m o r i ) Ｎ Ｙ ／ Ｔ 中 华 人 民 共 和 国 农 业 农 村 部 发 布NY/T４１９５􀆰４—２０２２ 前　　言 本文件按照GB/T１􀆰１—２０２０«标准化工作导则　第１部分:标准化文件的结构和起草规则»的规定 起草. NY/T４１９５«农药登记环境影响试验生物试材培养»分为８个部分: ———第１部分:蜜蜂; ———第２部分:日本鹌鹑; ———第３部分:斑马鱼; ———第４部分:家蚕; ———第５部分:大型溞; ———第６部分:近头状尖胞藻; ———第７部分:浮萍; ———第８部分:赤子爱胜蚓. 本文件是NY/T４１９５«农药登记环境影响试验生物试材培养»的第４部分. 请注意本文件的某些内容可能涉及专利.本文件的发布机构不承担识别专利的责任. 本文件由农业农村部种植业管理司提出并归口. 本文件起草单位:农业农村部农药检定所. 本文件主要起草人:赵秀振、单炜力、赵巧玲、袁善奎、沈兴家、王胜翔、周欣欣、陈朗、王寿山. ⅠNY/T４１９５􀆰４—２０２２ 农药登记环境影响试验生物试材培养 第４部分:家蚕 １　范围 本文件规定了农药环境影响试验用家蚕的引种、验收、催青、收蚁和饲育管理等技术方法,以及记录资 料要求. 本文件适用于试验用家蚕幼虫培养.适用于一代杂交种,包括春用蚕品种菁松×皓月,夏、秋用蚕品 种两广二号、秋丰×白玉等. ２　规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中,注日期的引用文件, 仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本 文件. NY/T３２７　桑蚕一代杂交种检验规程 NY/T１０９３　桑蚕一代杂交种繁育技术规程 ３　术语和定义 下列术语和定义适用于本文件. ３􀆰１ 滞育　diapause 昆虫生命活动过程中某一特定的发育时期,出现生长发育暂时停止的现象.家蚕以胚胎(卵)滞育. ３􀆰２ 催青　incubation 给已经解除滞育的蚕卵适当的温度、湿度和光照条件,使其孵化的过程. ３􀆰３ 蚁蚕　newlyＧhatchedsilkwormlarvae 从蚕卵里孵化出来尚未取食的幼虫,身体呈现褐色或赤褐色,身体小如蚂蚁. ３􀆰４ 眠　molting 家蚕幼虫生长到一定程度后,吐出少量丝,将腹足固定在蚕座上.不吃不动,头、胸部昂起,如睡眠 状态. ３􀆰５ 饷食　firstfeeding 家蚕幼虫眠起后第１次喂食. ３􀆰６ 龄期　instar 家蚕幼虫相邻２次蜕皮之间所经历的时间. ３􀆰７ 熟蚕　maturedsilkworm ５龄末期家蚕停止取食,将身体中的粪便排出,体躯缩短,丝腺充满整个体腔,身体呈半透明状,头胸 部昂起,左右摆动,口吐丝缕,寻找结茧的位置. １NY/T４１９５􀆰４—２０２２ ３􀆰８ 羽化　eclosion 蚕蛹经过发育变为成虫,并破茧而出的过程. ４　饲养设备与饲料 ４􀆰１　饲养设备 宜选用光照培养箱或人工气候箱,并配备培养皿、棉纸、蚕网、蔟具等蚕具,在催青前至少７d进行消 毒处理. ４􀆰２　培养箱消毒方法 ４􀆰２􀆰１　紫外消毒法 先用清水擦拭内壁,再用７０％~７５％的酒精擦拭,通风１０min后,紫外灯照射３０min. ４􀆰２􀆰２　化学消毒法 先用清水擦拭内壁,再用有效氯１􀆰０％漂白粉溶液对培养箱进行喷雾或擦拭处理,密闭保湿３０min. ４􀆰３　蚕具消毒方法 ４􀆰３􀆰１　高压灭菌法 将洗净的培养皿等蚕具置于灭菌锅中１２１℃下灭菌３０min. ４􀆰３􀆰２　煮沸消毒法:将培养皿等蚕具洗净后,置于沸水中消毒至少３０min. ４􀆰３􀆰３　化学消毒法:洗净的蚕具可用有效氯１􀆰０％漂白粉溶液浸泡３０min. ４􀆰３􀆰４　消毒后的蚕具宜放置在消过毒的场所晾干. ４􀆰４　饲料 ４􀆰４􀆰１　应选用新鲜、清洁、无污染的桑叶作为家蚕饲料. ４􀆰４􀆰２　于早晨雾散、露干后或傍晚夕阳未落时采摘新鲜桑叶.饲喂前用清水洗净,晾干或擦干叶面水分. ５　引种与验收 ５􀆰１　引种 ５􀆰１􀆰１　应选择能够提供蚕种生产、经营许可证的供应商. ５􀆰１􀆰２　蚕种生产应符合NY/T１０９３和NY/T３２７的规定,蚕种标签应当注明企业(种场)名称、企业(种 场)地址、品种名称、期别、批次、执行标准、卵量等内容. ５􀆰１􀆰３　尽可能缩短蚕种运输时间,运输过程中应避光及雨淋,防止剧烈震动和接触有毒物质,避免高温 (＞３０℃)、低温(＜０℃)等恶劣情况,以保证蚕种质量. ５􀆰２　验收 ５􀆰２􀆰１　引种后,实验室应进行验收检查,包括形态检查和孵化率检查. ５􀆰２􀆰２　形态检查 检查蚕卵的形态、色泽和饱满度等.正常蚕卵呈椭圆形扁平状,卵涡呈椭圆形,死卵的卵涡呈三角形 或有棱角的下凹;受精卵呈灰褐色或灰绿色,未受精卵为黄色或浅黄色. ５􀆰２􀆰３　孵化率检查 在蚕种引入后或试验前,取少量蚕卵进行孵化率(按６的要求执行)检查,孵化率应＞９５％. ５􀆰３　蚕种保存 刚收到的蚕种应冷藏(２℃~８℃)避光保存,保存时间最长不超过２个月,并在规定期限内催青使用. ６　催青与收蚁 ６􀆰１　催青日期 根据试验用蚕日期确定催青日期,必要时可提前进行催青时间测试.标准条件下蚕卵胚胎发育时间 ２NY/T４１９５􀆰４—２０２２ 表见附录A. ６􀆰２　催青方法 ６􀆰２􀆰１　蚕种从冷藏室中取出后,平摊于容器中,先置于１０℃~１５℃环境中平衡１h~２h,再放入培养箱 培养. ６􀆰２􀆰２　催青期间温度、湿度及光照条件见附录A,或简化为:温度(２５±１)℃,相对湿度７０％~９０％,自然 光照或人工光照,光照周期为:１６h~１８h光照,６h~８h黑暗.蚕卵发育到己４(点青期)(附录图A􀆰１) 时,转为黑暗培养. ６􀆰３　收蚁 ６􀆰３􀆰１　孵化当天早上感光,２h~３h后收蚁,收蚁全过程不能超过２h.如需延迟收蚁,可在蚕卵发育到 转青卵(附录图A􀆰１)时转为３℃~５℃避光冷藏保存,但延迟不宜超过５d.冷藏处理前后,需置于中间温 度１０℃~１５℃平衡４h~６h.延期收蚁时,应检查孵化率不低于９５％,方可用于试验. ６􀆰３􀆰２　收蚁方法 可用桑叶收蚁法,将新鲜无污染的桑叶整片或切成条状置于蚕卵上.待蚁蚕爬上桑叶后,将爬有蚁蚕 的桑叶移入饲育盒中. ７　饲育管理 ７􀆰１　幼虫期 ７􀆰１􀆰１　幼虫期的饲育条件见附录B􀆰１,用叶要求见附录B􀆰２. ７􀆰１􀆰２　幼虫眠前应及时除沙并换上消毒眠网,眠期应保持环境安静,空气新鲜,避免强风和振动,温度宜 比同龄期降低１℃~２℃,相对湿度７０％~７５％. ７􀆰１􀆰３　眠起饷食不宜过早,刚蜕皮的蚕头部为灰白色,变为淡褐色时,头左右摆动,显示求食状态时为饷 食适期.饷食叶要求新鲜,适熟偏嫩,给桑不宜过多. ７􀆰１􀆰４　饲育期间应淘汰弱小蚕、病蚕、迟眠蚕和晚起蚕,保证试验用蚕体质强健,发育整齐. ７􀆰２　蛹期 ７􀆰２􀆰１　５龄末期,见有熟蚕征兆时可抓蚕上蔟.蔟具宜使用折蔟,并在蔟下铺放吸水性强的材料.蔟中 温度(２４±１)℃,相对湿度６０％~７５％,弱光照,保持空气流通,避免直吹. ７􀆰２􀆰２　熟蚕上蔟终了后５d~８d采茧,采茧时操作应温和. ７􀆰３　羽化成虫 蚕茧采收后平摊于容器中,温度(２４±１)℃、相对湿度６０％~９０％条件下,经２周左右完成成虫发育, 蜕去蛹皮,吐出碱性肠液,润湿并疏解茧层,用胸足拨开茧丝钻出,羽化成蛾. ８　记录资料 对于每批次家蚕,实验室应保存完整的培养记录见附录C,包括: ———家蚕引种记录见附录表C􀆰１; ———家蚕催青与收蚁记录见附录表C􀆰２; ———家蚕饲育记录见见附录表C􀆰３. ３NY/T４１９５􀆰４—２０２２ 附　录　A (资料性) 标准条件下蚕卵胚胎发育时间表 　 A􀆰１　标准条件下蚕卵胚胎发育时间表 标准条件下蚕卵胚胎发育时间表见表A􀆰１. 表A􀆰１　标准条件下家蚕卵胚胎发育时间表 催青日期 胚子发育阶段 设定温度,℃ 相对湿度,％ 光照 滞育期 丙１(临界期Ⅰ) １５􀆰５~１７ ８０~８１ 第１d 丙２(最长期) １９~２０ ７４~７９ 第２d丁１~丁２(突起发生期) ２２ ７５ 第３d 戊１(突起发达前期) ２２ ７５ 第４d 戊２(突起发达后期) ２４ ７６自然光照 第５d 戊３(缩短期) ２５ ７９ 第６d 己１(反转期) ２５ ７９ 第７d 己２(反转终了期) ２５􀆰５ ８１ 第８d 己３(气管显现期) ２５􀆰５ ８４每日光照 １７h~１８h 第９d 己４(点青期) ２５􀆰５ ８４ 第１０d 己５(转青期) ２５􀆰５ ８４全天黑暗 第１１d 孵化 ２５􀆰５ ８４