2 0 2 2 1 1 1 1 发 布 － － 2 0 2 3 0 3 0 1 － － 实 施 化 学 农 药 土 壤 代 谢 试 验 准 则 1 7 中 华 人 民 共 和 国 农 业 行 业 标 准 备 案 号 ： X X X X - X X X X Ｉ Ｃ Ｓ 6 5 . 0 2 0 C C S B 4 1 9 1 — 2 0 2 2 C h e m i c a l p e s t i c i d e — — — G u i d e l i n e f o r s o i l m e t a b o l i s m t e s t Ｎ Ｙ ／ Ｔ 中 华 人 民 共 和 国 农 业 农 村 部 发 布NY/T４１９１—２０２２ 前　　言 本文件按照GB/T１􀆰１—２０２０«标准化工作导则　第１部分:标准化文件的结构和起草规则»的规定 起草. 请注意本文件的某些内容可能涉及专利.本文件的发布机构不承担识别专利的责任. 本文件由农业农村部种植业管理司提出并归口. 本文件起草单位:农业农村部农药检定所. 本文件主要起草人:周艳明、袁善奎、单炜力、周欣欣、陈朗、蓝帅. ⅠNY/T４１９１—２０２２ 化学农药　土壤代谢试验准则 １　范围 本文件规定了化学农药土壤代谢试验的试验方法. 本文件适用于挥发性较小或不具有挥发性的农药,不适用于在试验条件下不能保持在土壤中的极易 挥发的农药. ２　规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中,注日期的引用文件, 仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本 文件. GB/T３２７２３　土壤微生物生物量的测定　底物诱导呼吸法 GB/T３２７２６—２０１６　土壤质量Ｇ野外土壤描述 GB/T３９２２８　土壤微生物生物量的测定　熏蒸提取法 LY/T１２１５　森林土壤水分Ｇ物理性质的测定 LY/T１２２５　森林土壤颗粒组成(机械组成)的测定 LY/T１２４３　森林土壤阳离子交换量的测定 NY/T１１２１􀆰２　土壤检测　第２部分:土壤pH的测定 NY/T１１２１􀆰４　土壤检测　第４部分:土壤容重的测定 NY/T１１２１􀆰６　土壤检测　第６部分:土壤有机质的测定 NY/T３１５０　农药登记　环境降解动力学评估及计算指南 ISO１１２７４　土壤质量　持水能力的测定　实验室方法(SoilqualityＧDeterminationofwaterＧretenＧ tioncharacteristicＧLaboratorymethods) ３　术语和定义 下列术语和定义适用于本文件. ３􀆰１ 主要代谢物　majormetabolite 在土壤代谢试验中,在任何一次检测时间点中摩尔分数或放射性强度比例大于１０％的代谢物. ３􀆰２ 结合残留　boundresidues 用不改变其化学结构或土壤基质结构的方法不能提取出的残留物. ３􀆰３ 已提取残留　extractedresidues 已从土壤中提取出的残留物. ３􀆰４ 未提取残留　unextractedresidues 未从土壤中提取出的残留物. ３􀆰５ 矿化　mineralisation 有机物在好氧条件下完全降解为二氧化碳和水或在厌氧条件下完全降解为甲烷、二氧化碳和水的过 １NY/T４１９１—２０２２ 程.本文件中,当使用１４C标记的被试物时,矿化指被标记碳原子被氧化并释放出二氧化碳的过程. ４　试验概述 将被试物添加至土壤中,在恒定的温度和土壤水分含量的条件下避光培养,用适当的吸收装置收集挥 发性产物.定期取样检测土壤和吸收装置中的母体及代谢物,明确矿化率、结合残留和质量平衡回收率, 确定主要代谢物、计算母体和主要代谢物的５０％降解时间(DT５０)和９０％降解时间(DT９０). ５　仪器与试剂 ５􀆰１　仪器 ５􀆰１􀆰１　气体流动式培养装置构成见附录A. ５􀆰１􀆰２　定性定量分析仪器,如气相色谱仪、高效液相色谱仪、质谱仪、气相色谱Ｇ质谱联用仪、高效液相色 谱Ｇ质谱联用仪、核磁共振仪等. ５􀆰１􀆰３　液体闪烁计数仪. ５􀆰１􀆰４　氧化燃烧仪. ５􀆰１􀆰５　离心机. ５􀆰１􀆰６　提取、浓缩设备. ５􀆰２　试剂 除另有规定外,所有试剂均为分析纯. ５􀆰２􀆰１　氢氧化钠(NaOH,１３１０Ｇ７３Ｇ２),２mol/L或其他合适的碱液(如氢氧化钾(KOH,１３１０Ｇ５８Ｇ３)、２Ｇ羟 基乙胺[HO(CH２)２NH２,１４１Ｇ４３Ｇ５]. ５􀆰２􀆰２　硫酸(H２SO４,７６６４Ｇ９３Ｇ９),０􀆰０５mol/L. ５􀆰２􀆰３　乙二醇[(CH２OH)２,１０７Ｇ２１Ｇ１]. ６　被试物与对照物 ６􀆰１　被试物 ６􀆰１􀆰１　应使用同位素标记的被试物,宜使用１４C标记.标记的位置应在化合物的最稳定部分.对含有一 个环状结构的化合物,标记位点应选择在该环状结构;对含有多个环状结构的化合物,应在化合物不同环 状位置分别标记、分别开展试验. ６􀆰１􀆰２　仅测定降解速率时,可使用同位素标记的被试物,也可使用非标记的被试物. ６􀆰１􀆰３　使用同位素标记的被试物时,其放射化学纯度应≥９５％;使用非标记的被试物时,其含量应≥ ９５％. ６􀆰１􀆰４　试验开始前,应了解被试物的以下信息: ———水中溶解度; ———有机溶剂中的溶解度; ———饱和蒸汽压; ———正辛醇/水分配系数; ———在黑暗条件下的化学稳定性(水解); ———解离常数(对于易质子化或去质子化的被试物); ———土壤微生物毒性(如有); ———被试物及其代谢物的定性和定量分析方法(包括提取和净化方法). ６􀆰２　对照物 农药母体和代谢物的标准物质,不需同位素标记. ２NY/T４１９１—２０２２ ７　试验用土壤 ７􀆰１　土壤的选择 应使用能代表农药使用区域的土壤.使用多种土壤时,土壤的有机碳含量、pH、黏粒含量和微生物量 应有一定差异.土壤的理化性质宜满足以下要求: ———土壤质地为砂质壤土、粉壤土、壤土或壤质砂土; ———土壤pH为５􀆰０~８􀆰０; ———土壤有机碳含量为０􀆰５％~２􀆰５％; ———土壤微生物生物量＞土壤总有机碳的１％. ７􀆰２　土壤的采集 ７􀆰２􀆰１　４年内使用过被试物或与被试物结构类似农药的土壤不应用于试验. ７􀆰２􀆰２　应按GB/T３２７２６—２０１６附录C采集A发生层(或采集土壤表层２０cm)的土壤.除水稻土外,应 避免采集以下土壤: ———处于干旱、冰冻条件的土壤或被水覆盖的土壤; ———刚刚结束长期(＞３０d)干旱、冰冻条件或长期被水覆盖的土壤. ７􀆰２􀆰３　应记录采集区的地理位置、植被、农药和肥料使用情况及其他污染情况. ％１２４　土壤的运输与处理 ７􀆰２􀆰４　土壤样品在运输过程中应尽量保持土壤水分含量不发生变化,并置于黑暗通风处.可使用聚乙烯 袋储存,但袋口不宜系紧. ７􀆰２􀆰５　土壤采集后应尽快处理.先去除较大的动植物残体和石块,然后过２mm筛.过筛前不应过分干 燥或碾压土壤. ７􀆰４　土壤的保存 宜使用新鲜土壤开展试验,必须保存时,应采用以下保存方式: ———将土壤储存于温室中,并种植草、苜蓿等植物; ———将已处理过的土壤置于４℃±２℃条件下保存,最长可保存３个月. ７􀆰５　土壤性质的测定 至少应测定以下项目: ———土壤质地,按LY/T１２２５测定; ———pH,按NY/T１１２１􀆰２测定; ———阳离子交换量,按LY/T１２４３测定; ———总有机碳,按NY/T１１２１􀆰６测定; ———土壤容重,按NY/T１１２１􀆰４测定; ———持水能力或最大持水量;持水能力按ISO１１２７４测定,最大持水量按LY/T１２１５测定; ———土壤微生物生物量,宜按GB/T３９２２８测定,也可按GB/T３２７２３测定. ７􀆰６　土壤预培养 试验开始前,土壤应先进行预培养,预培养期间温度与湿度应与试验条件一致.预培养期间应去除发 芽的种子.预培养时间为２d~２８d,土壤保存与预培养的总时间不应超过土壤保存期限.对于水稻土培 养条件和水稻土厌氧培养条件,预培养时间应＞２周. ８　试验条件 ８􀆰１　温度 整个试验周期内,土壤应在黑暗、恒温条件下培养,试验温度宜为２０℃±２℃.如用同种土壤在 １０℃±２℃下开展平行试验可按NY/T３１５０计算该被试物的Q１０. ８􀆰２　土壤水分含量 ３NY/T４１９１—２０２２ ８􀆰２􀆰１　对于好氧培养条件下的代谢试验,土壤水分含量应保持在土壤最大持水量的４０％~６０％或pF２ ~pF２􀆰５(土壤水势为１×１０４Pa~３􀆰３×１０４Pa).土壤水分含量应以g水/kg干土(克水每千克干土壤)表 示.应定期(如每２周)测定培养瓶的质量并补水,补水时宜使用灭菌水.补水时应注意避免被试物和代 谢物的挥发或光解. ８􀆰２􀆰２　对于厌氧培养条件、水稻土培养条件和水稻土厌氧培养条件下的代谢试验,应保持土壤表面有水层. ８􀆰３　培养条件 ８􀆰３􀆰１　好氧培养条件 使用气体流动式培养装置时,应连续或间隙通入空气. ８􀆰３􀆰２　厌氧培养条件 添加被试物后,先在好氧培养条件下培养３０d或１个好氧DT５０(取二者较短者),然后加水至土壤表 面有１cm~３cm水层并通入惰性气体(如N２或Ar).培养系统应满足测定pH、溶解氧、氧化还原电位 的需要. ８􀆰３􀆰３　灭菌好氧培养条件 将土壤和被试物灭菌,并按８􀆰３􀆰１或８􀆰３􀆰４的条件培养. ８􀆰３􀆰４　水稻土培养条件 保持土壤表面有１cm~５cm的水层,宜为５cm.培养系统应与空气联通,并应满足测定pH、溶解 氧、氧化还原电位的需要. ８􀆰３􀆰５　水稻土厌氧