2 0 2 2 1 1 1 1 发 布 － － 2 0 2 3 0 3 0 1 － － 实 施 化 学 农 药 蚯 蚓 田 间 试 验 准 则 1 7 中 华 人 民 共 和 国 农 业 行 业 标 准 备 案 号 ： X X X X - X X X X Ｉ Ｃ Ｓ 6 5 . 0 2 0 C C S B 4 1 9 0 — 2 0 2 2 C h e m i c a l p e s t i c i d e — — — G u i d e l i n e f o r e a r t h w o r m f i e l d t e s t Ｎ Ｙ ／ Ｔ 中 华 人 民 共 和 国 农 业 农 村 部 发 布NY/T４１９０—２０２２ 前　　言 本文件按照GB/T１􀆰１—２０２０«标准化工作导则　第１部分:标准化文件的结构和起草规则»的规定 起草. 请注意本文件的某些内容可能涉及专利.本文件的发布机构不承担识别专利的责任. 本文件由农业农村部种植业管理司提出并归口. 本文件负责起草单位:农业农村部农药检定所. 本文件主要起草人:周艳明、王胜翔、袁善奎、周欣欣、单炜力、王寿山、宋伟华、赵秀振、王红. ⅠNY/T４１９０—２０２２ 化学农药　蚯蚓田间试验准则 １　范围 本文件规定了在田间条件下测定化学农药对蚯蚓影响试验的概述、试剂与材料、仪器设备、试验准备、 试验步骤、数据评估、计算和结果表达以及试验报告等的基本要求. 本文件适用于为化学农药登记而进行的蚯蚓田间试验. ２　规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中,注日期的引用文件, 仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本 文件. GB/T６６８２　分析实验室用水规格和试验方法 LY/T１２２５　森林土壤颗粒组成(机械组成)的测定 NY/T１１２１􀆰２　土壤检测　第２部分:土壤pH的测定 NY/T１１２１􀆰６　土壤检测　第６部分:土壤有机质的测定 NY/T２８８２􀆰８　农药登记　环境风险评估指南　第８部分:土壤生物 NY/T３１５０　农药登记　环境降解动力学评估及计算指南 ISO１１２７４　土壤质量　持水能力的测定　实验室方法(SoilqualityＧDeterminationofwaterＧretenＧ tioncharacteristicＧLaboratorymethods) ３　术语和定义 下列术语和定义适用于本文件. ３􀆰１ 丰度　abundance 单位面积上某一蚯蚓物种的个体数量. ４　试验概述 ４􀆰１　在各试验小区采集蚯蚓,并比较被试物处理小区与空白小区、对照物小区中蚯蚓的物种、数量和生物 量.根据被试物的性质确定试验周期,宜为１年.应在蚯蚓的活跃时期采样. ４􀆰２　每个处理小区应由４个随机分布的次级小区组成.对每次采集的各种蚯蚓的数量开展统计分析,通 过比较对照小区和处理小区的丰度、生物量和多样性确定被试物对蚯蚓的影响. 注:可在处理小区采集蚯蚓样品并检测蚯蚓体内的被试物浓度. ５　试剂与材料 除另有规定外,所有试剂均为分析纯,水为符合GB/T６６８２中规定的三级水. ５􀆰１　试剂 ５􀆰１􀆰１　异丙醇[(CH３)２CHOH,６７Ｇ６３Ｇ０]. ５􀆰１􀆰２　乙醇(CH３CH２OH,６４Ｇ１７Ｇ５). ５􀆰１􀆰３　异硫氰酸烯丙酯(C４H５NS,５７Ｇ０６Ｇ７):＞９４％(体积分数). ５􀆰１􀆰４　４％甲醛水溶液(HCHO,５０Ｇ００Ｇ０):１０％福尔马林固定液. ５􀆰１􀆰５　多菌灵制剂. １NY/T４１９０—２０２２ ５􀆰２　溶液配制 ５􀆰２􀆰１　乙醇水溶液(７０％):量取７３６􀆰８mL乙醇(５􀆰１􀆰２)于１０００mL容量瓶中,用水定容至刻度,混匀. ５􀆰２􀆰２　异硫氰酸烯丙酯水溶液:称取１g异硫氰酸烯丙酯(５􀆰１􀆰３)于１００mL烧杯中,加５０mL异丙醇溶 解,用自来水稀释至１０L.现配现用. ６　仪器设备 ６􀆰１　天平:感量０􀆰０１g. ６􀆰２　解剖显微镜:１０倍~４０倍. ６􀆰３　温度计. ６􀆰４　烘箱. ６􀆰５　塑料容器:２５０mL、５００mL. ６􀆰６　镊子. ６􀆰７　厚塑料薄膜.１m２~２m２. ６􀆰８　锹或铲. ６􀆰９　水罐:宜为２０L. ７　试验准备 ７􀆰１　试验点的选择 ７􀆰１􀆰１　试验点应在水平地面,作物和土壤性质应与周边区域相同,不应选择以下区域作为试验点: ———坡地; ———临近沟渠或树林的区域; ———压实的耕作路; ———土壤类型特殊的地点.例如,砂粒或黏粒含量过高的土壤. ７􀆰１􀆰２　试验点宜选择草地.草地试验点蚯蚓的密度应不低于１００条/m２,密度不足时应增加采样量.不 宜选择果园作为试验点,若以果园为试验点,应增加采样量或限制在特定区域采样. ７􀆰１􀆰３　若需要被试物在裸土中对蚯蚓影响的信息,可选择耕地作为试验点,耕地试验点试验开始前蚯蚓 的密度应不低于６０条/m２. ７􀆰１􀆰４　试验点应有所选择环境类型中常见的蚯蚓种群.例如,在农业区,重要的深栖类和内栖类蚯蚓物 种应不少于各类蚯蚓总量的１０％. ７􀆰１􀆰５　为满足上述要求,试验前应在选中的试验点采样并初步研究蚯蚓的物种分布概况. ７􀆰２　试验点信息 ７􀆰２􀆰１　对试验点的描述应包含以下信息: ———土壤颗粒组成,按照LY/T１２２５测定; ———土壤有机质含量,按照NY/T１１２１􀆰６测定; ———土壤pH,按照NY/T１１２１􀆰２测定; ———土壤最大持水量,按照ISO１１２７４测定; ———植被分布. ７􀆰２􀆰２　应全年记录气温和降水量,并在施药后每天记录土壤温度、含水率和日照时间. ７􀆰２􀆰３　应了解试验点的耕作历史和农药、化肥、污泥历史使用情况. ７􀆰３　试验设计 ７􀆰３􀆰１　根据试验目的和试验点的情况设计试验.至少设置１个空白小区(仅用水喷雾)、１个对照小区 (用对照物喷雾)和１个处理小区(施用被试物),每个小区设４个次级小区.设置多个不同剂量的被试物 ２NY/T４１９０—２０２２ 处理小区更有助于环境风险评估. ７􀆰３􀆰２　试验应采用随机完全区组设计.应根据被试物处理小区数量和采样时间确定试验小区数量及试 验地的面积. ７􀆰３􀆰３　每个小区的面积至少１００m２(１０m×１０m).应在小区的中部采样,以保证采样区域周边有 １m~２m宽的被试物或对照物处理过的边缘地带,小区布置示意图见图１. 标引序号说明: １———采样区域; ２———边缘地带. 图１　试验小区示意图 ７􀆰３􀆰４　同一天采样的２个采样区域应相距至少２m,后续采样时不应在已采样过的区域采样. ７􀆰３􀆰５　根据蚯蚓种群的密度和分布确定采样区域的数量.每个小区至少设置４个次级小区(重复),每个 次级小区取４个随机样品(每个小区１６个独立样品). ７􀆰３􀆰６　对于在田间DisT９０＜３６５d的农药(DisT９０按照NY/T３１５０计算),宜按单次被试物用量设计处 理组,必要时根据被试物的使用方法单独设计额外的处理组,单独设计额外的处理组时应考虑作物的叶面 拦截系数.对于田间DisT９０＞３６５d的被试物,也宜按单次用量设计处理组,必要时根据被试物的使用方 法单独设计额外的处理组,但第一次施药时也应包含按土壤深度为１０cm计算的稳态坪浓度(稳态坪浓度 按照NY/T２８８２􀆰８计算),除第一次施药外,施药时应考虑作物的叶面拦截系数. ７􀆰４　试验地的日常维护 ７􀆰４􀆰１　草地试验点应定期(每年２次~６次)用覆盖式割草机割草,割下的草应保留在原地.割草应在施 用被试物前１周~２周进行.可仅保留施药前最后一次割下的草. ７􀆰４􀆰２　当试验在耕地上进行时,应按常规农事操作进行,但试验期间应避免翻耕或其他土壤处理措施. ７􀆰４􀆰３　试验小区不应使用被试物之外的农药,如必须使用农药,应选择对蚯蚓低毒且风险可接受的农药; 若被试物为除草剂,耕地或草地(含对照小区)在试验开始前应先用另一种除草剂(非被试物)处理、耕地、 再播种,施用除草剂(非被试物)和除草剂(被试物)应间隔至少１周.在解释试验结果时,应注意即使是使 用对蚯蚓无影响的农药,其与被试物之间也可能发生相互作用. ７􀆰４􀆰４　若施药后３d内降水量很少或没有降水,应喷灌.灌溉应安排在采样前１周~２周.灌溉量应根 据试验地的气候条件确定,并在试验区域内均匀分布.施药后３d内,降水量和灌溉量总计达到１０mm 为宜. ８　试验步骤 ８􀆰１　施药 根据委托方提供的被试物的施药剂量、剂型、施用方法等信息施药.施药设备宜与农业生产中所用设 备相近(例如,使用相同的喷雾器、相同的药液量),使用前应校准施药器具.按被试物可能使用的最大用 量施药.多次施药时,根据推荐的施药次数和间隔时间,按上述方法施药.宜在春季进行施药. ８􀆰２　采样 ８􀆰２􀆰１　采样时间 ８􀆰２􀆰１􀆰１　施药前应全面采样以获取蚯蚓物种组成、密度、均匀性等方面的信息. ３NY/T４１９０—２０２２ ８􀆰２􀆰１􀆰２　每次施药后１d~２d或灌溉后,应收集土壤表面的蚯蚓. ８􀆰２􀆰１􀆰３　施用被试物后,应在蚯蚓活跃期至少采样３次,其采样时间如下: ———第１次采样:施药后１个月~３个月; ———第２次采样:施药后４个月~６个月; ———第３次采样:施药后１２个月. ８􀆰２􀆰１􀆰４　试验时间根据被试物的性质确定.需要观察更长时间时,应间隔半年,并在蚯蚓的活跃期采样. ８􀆰２􀆰１􀆰５　不应在环境条件不适宜(低土壤湿度和/或高温),蚯蚓处于滞育状态时采样. 注:在温带,不适宜的环境条件出现在冬季和盛夏. ８􀆰２􀆰２　采