2 0 2 2 1 1 1 1 发 布 － － 2 0 2 3 0 3 0 1 － － 实 施 化 学 农 药 鱼 类 早 期 生 活 阶 段 毒 性 试 验 准 则 1 7 中 华 人 民 共 和 国 农 业 行 业 标 准 备 案 号 ： X X X X - X X X X Ｉ Ｃ Ｓ 6 5 . 0 2 0 C C S B 4 1 8 6 — 2 0 2 2 C h e m i c a l p e s t i c i d e — G u i d e l i n e f o r f i s h , e a r l y - l i f e s t a g e t o x i c i t y t e s t Ｎ Ｙ ／ Ｔ 中 华 人 民 共 和 国 农 业 农 村 部 发 布NY/T４１８６—２０２２ 前　　言 本文件按照GB/T１􀆰１—２０２０«标准化工作导则　第１部分:标准化文件的结构和起草规则»的规 定起草. 请注意本文件的某些内容可能涉及专利.本文件的发布机构不承担识别专利的责任. 本文件由农业农村部种植业管理司提出并归口. 本文件负责起草单位:农业农村部农药检定所、中国农业科学院植物保护研究所. 本文件主要起草人:陈朗、周欣欣、吴声敢、杨海荣、刘新刚、胡秀卿、韩雪、陈超、李肇丽、袁善奎. ⅠNY/T４１８６—２０２２ 化学农药　鱼类早期生活阶段毒性试验准则 １　范围 本文件规定了化学农药对鱼类早期生活阶段毒性试验的材料、条件、仪器设备、试验步骤、数据处理、 质量控制和试验报告等的基本要求. 本文件适用于为化学农药登记而进行的鱼类早期生活阶段毒性试验,其他类型的农药可参照使用. ２　规范性引用文件 本文件没有规范性引用文件. ３　术语和定义 下列术语和定义适用于本文件. ３􀆰１ 最低可观察效应浓度　lowestobservedeffectconcentration,LOEC 在一定暴露期内,与对照组相比,对受试生物在统计学意义上(p＜０􀆰０５)产生显著影响的最低试验浓 度,用LOEC表示. 注:单位为毫克有效成分每升(mga􀆰i􀆰/L)或微克有效成分每升(μga􀆰i􀆰/L). ３􀆰２ 无可观察效应浓度　noobservedeffectconcentration,NOEC 在一定暴露期内,与对照组相比,对受试生物在统计学意义上(p＜０􀆰０５)无显著影响的最高试验浓 度,用NOEC表示,即仅低于LOEC的被试物浓度. 注:单位为毫克有效成分每升(mga􀆰i􀆰/L)或微克有效成分每升(μga􀆰i􀆰/L). ３􀆰３ x％效应浓度　x％effectiveconcentration,ECx 在一定暴露期内,引起受试生物产生x％毒性效应的被试物浓度,用ECx表示.例如,半数效应浓度 以EC５０表示,１０％效应浓度以EC１０表示. 注:单位为毫克有效成分每升(mga􀆰i􀆰/L)或微克有效成分每升(μga􀆰i􀆰/L). ３􀆰４ 标准长　standardlength,SL 指从受试生物吻端到尾鳍前端(不含尾鳍)的长度. ３􀆰５ 全长　totallength,TL 指从受试生物吻端到尾鳍最长叶端的直线长度. ４　试验概述 采用流水式或半静态试验法,将受试生物暴露于一定浓度范围的试验溶液中进行鱼类早期生活阶段 的毒性测试.从将鱼受精卵加入试验溶液中开始试验,至对照组中受试鱼生长至某一特定生活阶段时(如 所有的鱼均能自由摄食２周后)结束试验.通过评价试验期间被试物对受试鱼的致死毒性效应和亚致死 毒性效应并与对照组进行比较,获得被试物对鱼类早期生活阶段的最低可观察效应浓度(LOEC)和无可 观察效应浓度(NOEC).如可能,计算x％效应浓度ECx(如EC１０、EC２０、EC５０)及其置信区间. ５　试验方法 ５􀆰１　材料和条件 １NY/T４１８６—２０２２ ５􀆰１􀆰１　被试物 农药原药或制剂.试验前应收集被试物的基本信息,包括但不限于以下数据: ５􀆰１􀆰１􀆰１　溶解性. ５􀆰１􀆰１􀆰２　蒸气压. ５􀆰１􀆰１􀆰３　鱼类急性毒性试验结果. ５􀆰１􀆰１􀆰４　鱼类胚胎和卵黄囊仔鱼阶段的短期毒性试验结果等. ５􀆰１􀆰２　试验用水 ５􀆰１􀆰２􀆰１　试验用水应满足鱼类长期生存与正常生长的需要,并保持水质恒定. ５􀆰１􀆰２􀆰２　定期(如每年２次)进行水质检测.试验用水的水质指标要求应符合附录A的要求. ５􀆰１􀆰３　试验条件 根据受试鱼的种类选择适宜的试验条件(如温度、光照等),具体要求见附录B. ５􀆰１􀆰４　试验容器 试验容器应采用玻璃、不锈钢或其他化学惰性材质,尽量避免硅酮管、硅胶密封圈等与试验用水接触. 容器尺寸应满足承载量要求. ５􀆰１􀆰５　鱼种选择 推荐鱼种见表１,包括４种淡水鱼类和２种海水鱼类.如果选用其他鱼种作为受试鱼,应根据其生理 习性选择适宜的饲育和试验条件,并在试验报告中详细说明试验鱼种的选择理由、来源、驯养与繁育情况, 以及试验方法. 表１　推荐使用的鱼种 淡水鱼类 海水鱼类 Oncorhynchusmykiss,虹鳟 Cyprinodonvariegatus,杂色鳉 Pimephalespromelas,胖头鱥 Menidiasp,月银汉鱼属 Daniorerio,斑马鱼 — Oryziaslatipes,青鳉 — ５􀆰１􀆰６　试验鱼种的驯养 受试生物亲鱼的驯养条件见附录B. ６　主要仪器设备 ６􀆰１　天平(感量０􀆰０００１g以上). ６􀆰２　溶解氧仪. ６􀆰３　pH计. ６􀆰４　温度监控设备. ６􀆰５　分析仪器. ６􀆰６　烘箱. ６􀆰７　显微镜. ６􀆰８　硬度计. ６􀆰９　盐度计(海水鱼试验). ６􀆰１０　鱼类繁殖装置等. ７　试验步骤 ７􀆰１　试验方法的选择 ７􀆰１􀆰１　　根据被试物的特性选择半静态法或流水式法进行试验.采用半静态法时,试验溶液中被试物的 ２NY/T４１８６—２０２２ 浓度应保持在设定浓度或初始测定浓度的±２０％.对于难处理农药(难溶或略溶于水、易挥发、易降解、易 被吸附、疏水性、离子型或多组分农药等),参考NY/T３２７３选择试验方法. ７􀆰１􀆰２　　半静态试验更换试验溶液时,宜将受试生物留在试验容器内,至少更新２/３试验溶液,也可将受 试生物轻轻地移入盛有新配制试验溶液的清洁容器中. ７􀆰１􀆰３　　采用流水式方法时,试验前应对试验系统的药液输送与稀释能力进行校准和确认.试验过程中 应定期检查储备液与稀释用水的流量,使试验溶液中被试物的浓度变化控制在±１０％,且每２４h流量应 超过试验容器容积的５倍. ７􀆰１􀆰４　　试验溶液制备过程应优先采用简单方法,如搅拌或超声.不推荐使用有机溶剂或分散剂(助溶 剂),如需使用,其用量应尽可能≤１００mg/L或≤０􀆰１mL/L,且各试验容器中的用量应尽可能保持一致. ７􀆰２　试验浓度 ７􀆰２􀆰１　根据被试物的已知毒性数据和预试验结果等确定正式试验的浓度范围. ７􀆰２􀆰２　按一定比例间距设置至少５个处理组(几何级差控制在３􀆰２倍以内),以及空白对照组.若使用助 溶剂,应同时设置溶剂对照组.每个处理组和对照组至少４个重复.试验容器的摆放应符合完全随机或 随机区组设计. ７􀆰２􀆰３　限度试验的浓度为所测试鱼种的９６hLC５０或１０mga􀆰i􀆰/L(二者取较低值). ７􀆰３　试验周期 应于鱼卵受精后立即开始试验.将受精卵在开始卵裂之前(或尽可能接近这一阶段之后)浸泡在试验 溶液中(斑马鱼受精卵初期发育阶段见附录B).试验周期视受试鱼种而定(附录B). ７􀆰４　承载量 ７􀆰４􀆰１　试验开始时,将受精卵随机分配至各处理组中,每个处理组至少８０粒卵,平均分配到至少４个重 复中. ７􀆰４􀆰２　承载量不宜过高,以保证试验溶液中的溶解氧浓度保持在空气饱和值(ASV)的６０％以上.采用 流水式方法时,２４h流量的承载量不应超过０􀆰５g湿重/L,且容器内溶液的承载量不应超过５g湿重/L. ７􀆰５　受试生物的转移 胚胎和新孵出的仔鱼最初可在小号玻璃或不锈钢容器内进行暴露.然后,在适宜阶段将受试生物转 移至大号试验容器中.转移时间视受试鱼种而异(参见附录C),转移过程中应保持受试生物始终在水中. ７􀆰６　饲喂 针对受试生物的不同生长阶段,适时、适量地投喂相应的饵料,投饵量在确保使鱼吃饱的同时应尽量 减少残饵量.试验过程中,应及时清除残饵和粪便.饲喂方案见附录C. ７􀆰７　水质测定与化学分析 ７􀆰７􀆰１　试验开始前,应建立试验溶液中被试物的分析方法,并进行方法验证. ７􀆰７􀆰２　试验期间,至少每周测定１次所有试验容器中试验溶液的溶解氧、pH和温度.在试验开始和 结束时,测定硬度和盐度(适用于海水鱼试验).同时,对试验温度进行持续监测(至少监测其中１个试 验容器). ７􀆰７􀆰３　试验期间,至少应定期进行５批次以上浓度分析.试验周期超过１个月的,至少每周测定１次. 每次至少测定１个重复试验溶液中的被试物浓度,各重复轮流采样.分析样品采集后,可进行过滤(如 ０􀆰４５μm滤膜)或离心处理,以去除颗粒物质.采取过滤处理方式时,宜先取一定量的样品过滤使滤膜达 到饱和,再取续滤液用于分析. ７􀆰７􀆰４　若测定浓度未超出设定浓度的８０％~１２０％,可用测定浓度或理论浓度表示试验结果.若测定浓 度超出设定浓度的８０％~１２０％,流水式试验中以测定浓度的算术平均值表示试验结果,半静态试验中以 测定浓度的几何平均值表示试验结果. ７􀆰８　观察与测定 ７􀆰８􀆰１　试验开始时,应记录受精卵的发育时期. ３NY/T４１８６—２０２２ ７􀆰８􀆰２　试验期间,应每天观察并记录受试生物的孵化数与存活数,并将死亡个体移走