2 0 2 2 1 1 1 1 发 布 － － 2 0 2 3 0 3 0 1 － － 实 施 蜜 蜂 中 5 7 种 农 药 及 其 代 谢 物 残 留 量 的 测 定 液 相 色 谱 - 质 谱 联 用 法 和 气 相 色 谱 - 质 谱 联 用 法 1 7 中 华 人 民 共 和 国 农 业 行 业 标 准 备 案 号 ： X X X X - X X X X Ｉ Ｃ Ｓ 6 5 . 0 2 0 C C S B 4 1 8 4 — 2 0 2 2 D e t e r m i n a t i o n o f 5 7 p e s t i c i d e s a n d t h e i r m e t a b o l i t e s r e s i d u e s i n h o n e y b e e — L i q u i d c h r o m a t o g r a p h y - t a n d e m m a s s s p e c t r o m e t r y a n d G a s c h r o m a t o g r a p h y - t a n d e m m a s s s p e c t r o m e t r y m e t h o d Ｎ Ｙ ／ Ｔ 中 华 人 民 共 和 国 农 业 农 村 部 发 布NT/T４１８４—２０２２ 前　　言 本文件按照GB/T１􀆰１—２０２０«标准化工作导则　第１部分:标准化文件的结构和起草规则»的规定 起草. 请注意本文件的某些内容可能涉及专利.本文件的发布机构不承担识别专利的责任. 本文件由农业农村部种植业管理司提出并归口. 本文件起草单位:农业农村部农药检定所、中国农业科学院蜜蜂研究所. 本文件主要起草人:张金振、袁善奎、周欣欣、宋梓豪、赵文、陈朗、周艳明、韩平、毛连纲、蓝帅、刘伟. ⅠNT/T４１８４—２０２２ 蜜蜂中５７种农药及其代谢物残留量的测定　液相色谱Ｇ 质谱联用法和气相色谱Ｇ质谱联用法 １　范围 本文件规定了蜜蜂中５７种农药及其代谢物残留量的液相色谱Ｇ质谱联用和气相色谱Ｇ质谱联用测定 方法. 注:５７种农药及其代谢物的种类见附录A. 本文件适用于蜜蜂中５７种农药及其代谢物残留量的测定. ２　范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中,注日期的引用文件, 仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本 文件. GB/T６６８２　分析实验室用水规格和试验方法 ３　术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义. ４　原理 试样用乙腈提取,提取液经分散固相萃取净化,液相色谱Ｇ质谱联用仪和气相色谱Ｇ质谱联用仪测定, 外标法定量. ５　试剂和材料 以下所用试剂,除非另有说明,均为分析纯,水为符合GB/T６６８２规定的一级水. ５􀆰１　试剂 ５􀆰１􀆰１　甲醇(CH３OH,６７Ｇ５６Ｇ１):色谱纯. ５􀆰１􀆰２　乙腈(CH３CN,７５Ｇ０５Ｇ８):色谱纯. ５􀆰１􀆰３　乙酸乙酯(CH３COOC２H５,１４１Ｇ７８Ｇ６):色谱纯. ５􀆰１􀆰４　甲酸(HCOOH,６４Ｇ１８Ｇ６):优级纯. ５􀆰１􀆰５　乙酸铵(CH３COONH,６３１Ｇ６１Ｇ８):优级纯. ５􀆰１􀆰６　氟化铵(NH４F,１２１２５Ｇ０１Ｇ８):优级纯. ５􀆰１􀆰７　无水硫酸镁(MgSO４,７４８７Ｇ８８Ｇ９). ５􀆰１􀆰８　氯化钠(NaCl,７６４７Ｇ１４Ｇ５). ５􀆰１􀆰９　柠檬酸钠(C６H５Na３O７,６１３２Ｇ０４Ｇ３). ５􀆰１􀆰１０　柠檬酸氢二钠(C６H８Na２O８,６１３２Ｇ０５Ｇ４). ５􀆰２　溶液配制 ５􀆰２􀆰１　５mol/L乙酸铵溶液:称取３８􀆰５g乙酸铵,加水溶解并定容至１００mL. ５􀆰２􀆰２　５００mmol/L氟化铵溶液:称取１􀆰９g氟化铵,加水溶解并定容至１００mL. ５􀆰３　标准品 ５７种农药及其代谢物:纯度≥９５％. １NY/T４１８４—２０２２ ５􀆰４　标准溶液配制 ５􀆰４􀆰１　标准储备液(１０００mg/L):准确称取１０mg(精确至０􀆰０１mg)各农药标准品,农药标准品的相关 信息见附录A.根据标准品的溶解度选择甲醇、丙酮或乙腈等溶剂溶解并定容至１０mL,避光－１８℃保 存,有效期６个月. ５􀆰４􀆰２　混合标准储备液(１０mg/L):吸取一定量的农药标准储备液(５􀆰４􀆰１)于容量瓶中用乙腈定容至刻 度,避光－１８℃保存,有效期６个月. ５􀆰４􀆰３　混合中间液(１mg/L):吸取一定量的混合标准储备液(５􀆰４􀆰２)于容量瓶中,用乙腈定容至刻度,避 光－１８℃保存,有效期１个月. ５􀆰５　材料 ５􀆰５􀆰１　乙二胺ＧNＧ丙基硅烷化硅胶(PSA):４０μm~６０μm,６０Å. ５􀆰５􀆰２　封端的十八烷基硅烷键合硅胶(C１８):４０μm~６０μm,６０Å. ５􀆰５􀆰３　惰化处理陶瓷均质子:２cm(长)´１cm(外径). ５􀆰５􀆰４　PTFE滤膜(水相有机相兼容):０􀆰２２μm. ６　仪器和设备 ６􀆰１　液相色谱Ｇ质谱联用仪:配电喷雾离子源(ESI). ６􀆰２　气相色谱Ｇ质谱联用仪:配电子轰击源(EI). ６􀆰３　分析天平:感量０􀆰０１mg和０􀆰０１g. ６􀆰４　涡旋振荡器. ６􀆰５　冷冻离心机:转速不低于９０００r/min. ６􀆰６　研磨机. ６􀆰７　氮吹仪. ６􀆰８　具塞离心管:１０mL、１５mL、５０mL. ７　试样的制备和保存 将蜜蜂样品称重并计数,在干冰或液氮等冷冻条件下放入研磨机充分研磨,并置于－１８℃条件下保存 备用.在试样制备过程中应防止样品污染或残留物含量发生变化. ８　分析步骤 ８􀆰１　提取 称取５g试样(精确至０􀆰０１g)于５０mL塑料离心管中,加入１０mL水及１颗陶瓷质子(５􀆰５􀆰３)涡旋 混匀１min,静置３０min.加入１０mL乙腈(５􀆰１􀆰２)涡旋混匀１min,于－１８℃冷冻３０min降温,再加入４ g无水硫酸镁、１g氯化钠、１g柠檬酸钠、０􀆰５g柠檬酸氢二钠,剧烈振荡１min,于４℃,９０００r/min离心 １０min. ８􀆰２　净化 称取１􀆰２g硫酸镁(５􀆰１􀆰７)、０􀆰４gPSA(５􀆰５􀆰１)及０􀆰４gC１８(５􀆰５􀆰２)于１５mL塑料离心管中,准确吸 取７mL上清液加入其中,涡旋混匀１min,于４℃,９０００r/min离心１０min.准确吸取０􀆰５mL上清液,加 入０􀆰５mL水稀释混匀,过微孔滤膜(５􀆰５􀆰４)待液相色谱Ｇ质谱联用仪测定.准确吸取１􀆰５mL上清液于１０ mL试管中,４０℃水浴中氮气吹至近干.加入１mL乙酸乙酯复溶,过微孔滤膜(见５􀆰５􀆰４)待气相色谱Ｇ质 谱联用仪测定. ８􀆰３　测定 ８􀆰３􀆰１　色谱Ｇ质谱参考条件 ８􀆰３􀆰１􀆰１　A组农药及其代谢物液相色谱Ｇ串联质谱条件 ２NT/T４１８４—２０２２ a)　色谱柱:C１８(１５０mm×３􀆰０mm,１􀆰８μm)或相当者; b)　流动相:A为水溶液(含２mmol/L乙酸铵,０􀆰０５％甲酸),B为甲醇(含０􀆰０５％甲酸);流动相梯度 洗脱条件见表１: c)　柱温:４０℃; d)　进样量:３μL; e)　电离方式:电喷雾电离; f)　扫描方式:正离子扫描; g)　雾化气:氮气; 表１　流动相及梯度洗脱条件 步骤时间 min流速 mL/min流动相A ％流动相B ％ １ ０ ０􀆰４ ８０ ２０ ２ ３ ０􀆰４ ５０ ５０ ３ １３ ０􀆰４ ０ １００ ４ １７ ０􀆰４ ０ １００ ５ １７􀆰１ ０􀆰４ ８０ ２０ ６ ２３ ０􀆰４ ８０ ２０ h)　雾化气压力:３５psi; i)　离子喷雾电压:３５００V; j)　干燥器温度:２５０℃; k)　干燥气流速:７L/min; l)　检测方式:动态多反应监测(DMRM),监测离子对、碰撞能见附录B. ８􀆰３􀆰１􀆰２　B组农药及其代谢物液相色谱Ｇ串联质谱条件 a)　色谱柱:C８(１００mm×２􀆰１mm,２􀆰７μm)或相当者; b)　流动相:A为水溶液(含有５mmol/L乙酸铵,０􀆰１％甲酸),B为乙腈(含有５mmol/L乙酸铵, １０％水,０􀆰１％甲酸),流动相梯度洗脱条件见表２; 表２　流动相及梯度洗脱条件 步骤时间 min流速 mL/min流动相A ％流动相B ％ １ ０ ０􀆰３ ９５ ５ ２ ２􀆰５ ０􀆰３ １０ ９０ ３ ２􀆰６ ０􀆰３ ５ ９５ ４ ７􀆰５ ０􀆰３ ５ ９５ ５ ８ ０􀆰３ ９５ ５ ６ １３ ０􀆰３ ９５ ５ c)　柱温:４０℃; d)　进样量:２５μL; e)　电离方式:电喷雾电离; f)　扫描方式:正离子扫描; g)　雾化气:氮气; h)　雾化气压力:３０psi; i)　离子喷雾电压:４０００V; j)　干燥器温度:２００℃; k)　干燥气流速:７L/min; ３NY/T４１８４—２０２２ l)　检测方式:多反应监测(MRM),监测离子对、碰撞能见附录B. ８􀆰３􀆰１􀆰３　C组农药及其代谢物液相色谱Ｇ串联质谱条件 a)　色谱柱:C１８(１００mm×２􀆰１mm,３􀆰５μm)或相当者; b)　流动相:A为水溶液(含０􀆰５mmol/L氟化铵),B为甲醇,流动相梯度洗脱条件见表３; 表３　流动相及梯度洗脱条件 步骤时间 min流速 mL/min流动相A ％流动相B ％ １ ０ ０􀆰４ ６０ ４０ ２ ２ ０􀆰４ ４０ ６０ ３ ５ ０􀆰４ ５ ９５ ４ ９ ０􀆰４ ５ ９５ ５ ９􀆰５ ０􀆰４ ０ １００ ６ １１􀆰５ ０􀆰４ ０ １００ ７ １１􀆰６ ０􀆰４ ６０ ４０ ８ １７ ０􀆰４ ６０ ４０ c)　柱