2 0 2 2 1 1 1 1 发 布 － － 2 0 2 3 0 3 0 1 － － 实 施 牛 人 工 授 精 技 术 规 程 4 3 中 华 人 民 共 和 国 农 业 行 业 标 准 备 案 号 ： X X X X - X X X X Ｉ Ｃ Ｓ 6 5 . 0 2 0 . 3 0 C C S B 1 3 3 5 — 2 0 2 2 T e c h n i c a l c o d e o f p r a c t i c e f o r b o v i n e a r t i f i c i a l i n s e m i n a t i o n Ｎ Ｙ ／ Ｔ 中 华 人 民 共 和 国 农 业 农 村 部 发 布 ´úÌæ N Y / T 1 3 3 5 — 2 0 0 7NY/T１３３５—２０２２ 前　　言 本文件按照GB/T１􀆰１—２０２０«标准化工作导则　第１部分:标准化文件的结构和起草规则»的规定 起草. 本文件代替NY/T１３３５—２００７«牛人工授精技术规程»,与NY/T１３３５—２００７相比,除结构调整和编 辑性改动外,主要技术变化如下: a)　删除了冷冻精液、冷冻精液解冻、受胎率、繁殖率术语和定义(见２００７年版第３章); b)　增加了同期排卵、２１d情期受胎率、２１d参配率、妊娠诊断术语和定义(见第３章); c)　更改了发情鉴定定义(见第３章３􀆰２); d)　增加了技术流程(见第４章); e)　删除了输精器准备中球式玻璃输精器使用(见２００７年版的５􀆰６􀆰１); f)　增加了尾根标记法、辅助监测法、同期排卵Ｇ定时输精法(见第６章); g)　增加了证实方法(见第９章); h)　删除了妊娠诊断外部观察(见２００７版的８􀆰１); i)　更改了附录A(见附录A); j)　删除了附录B(见２００７年版的附录B); k)　增加了附录B(见附录B). 请注意本文件的某些内容可能涉及专利.本文件的发布机构不承担识别专利的责任. 本文件由农业农村部种业管理司提出. 本文件由全国畜牧业标准化技术委员会(SAC/TC２７４)归口. 本文件起草单位:北京奶牛中心、农业农村部牛冷冻精液质量监督检验测试中心(北京)、北京首农畜 牧发展有限公司奶牛中心、农业农村部种畜质量检验中心、全国畜牧总站、农业农村部牛冷冻精液质量监 督检验测试中心(南京)、中国农业大学、新疆农业大学、河北农业大学. 本文件主要起草人:麻柱、王彦平、孙飞舟、田见晖、陆汉希、李俊杰、阿布力孜􀅰吾斯曼、刘振君、吴胜 权、杨超、李艳华、赵凤、张建聪、安磊、侯自鹏、吕小青. 本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为: ———２００７年首次发布为NY/T１３３５—２００７; ———本次为第一次修订. ⅠNY/T１３３５—２０２２ 牛人工授精技术规程 １　范围 本文件确立了牛人工授精操作流程,规定了参配母牛选择、母牛发情鉴定、输精前准备和输精等技术 要求,描述了证实方法. 本文件适用于普通牛人工授精技术操作. ２　规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中,注日期的引用文件, 仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本 文件. GB４１４３　牛冷冻精液 ３　术语和定义 下列术语和定义适用于本文件 ３􀆰１　 人工授精　artificialinsemination 人为借助专门器械,将采集的种公牛精液经检查、稀释、保存等处理合格后,输入到发情母牛生殖道 内,使其妊娠的一种繁殖技术. ３􀆰２　 发情鉴定　estrusidentification 根据母牛发情时的行为、生殖器官等生理方面的变化,判断母牛发情状态的方法. 注:包括自然观察法、尾根标记法、辅助发情监测等. ３􀆰３　 同期排卵　estrussynchronization 使用外源激素处理,使母牛群体在一定时间内集中发情排卵的技术. ３􀆰４　 情期受胎率　conceptionrate 相同时间段内,受胎牛只数占情期参配牛只总数的百分比. ３􀆰５　 ２１d情期受胎率　２１Ｇdayconceptionrate 一个２１d发情周期内,群体中妊娠牛头数占参配牛情期总数的百分比. ３􀆰６　 ２１d参配率　２１Ｇdayreferencerate 一个２１d发情周期内,群体中参与配种的牛头数占应配种的牛头数百分比. ３􀆰７　 妊娠诊断　pregnancydiagnosis 根据母牛配种后发生的一系列生理变化,采取相应检查方法,判断母牛是否妊娠及妊娠阶段的方法. ４　技术流程 牛人工授精技术流程包括参配母牛选择、母牛发情鉴定、输精前准备和输精.牛人工授精技术流程见 图１. １NY/T１３３５—２０２２ 图１　牛人工授精技术流程 ５　参配母牛选择 应选择健康、繁殖机能正常的适龄空怀牛. ６　母牛发情鉴定 可选用下列方法鉴定母牛发情: a)　行为观察法:母牛静立接受爬跨鉴定为发情.每天人工观察次数不少于３次,每次每个牛舍(牛 群)观察时间不少于３０min. b)　尾根标记法:每天应在参配母牛尾根处用蜡笔涂抹标记(长１５cm,宽３cm~５cm),并每天检查 蜡笔标记残存情况.如果蜡笔标记被摩擦消失或大部分消失,则鉴定母牛为发情. c)　辅助监测法:通过计步器等电子设备监测牛并根据其活动量增加情况确定母牛发情. d)　直肠检查法:经直肠检查,如果卵巢体积增大,卵泡体积增大、凸出明显、光滑有弹性、有波动感, 则判断参配母牛为发情. e)　同期排卵Ｇ定时输精法:利用外源激素按照一定的时间顺序处理后的母牛,视为全部发情,可参加 配种.具体的处理方案见附录A. ７　输精前准备 ７􀆰１　器具清洗和消毒 输精用器具和器械应进行清洗、消毒,不同器具和器械消毒方法如下: a)　玻璃器皿、金属器械:在热水中加洗涤剂刷洗或超声波清洗仪清洗,蒸馏水冲洗后置于干燥箱 １８０℃灭菌９０min~１２０min; b)　一次性塑料制品:可置于紫外灯下照射０􀆰５h. ７􀆰２　冷冻精液准备 ７􀆰２􀆰１　冷冻精液解冻 冷冻精液应浸泡在液氮生物容器中,冷冻精液离开液氮面应不超过５s.细管冻精置于(３７±１)℃水 浴解冻１０s~１５s. ２NY/T１３３５—２０２２ ７􀆰２􀆰２　精液质量检测 解冻后精子活力符合GB４１４３的要求,方可用于输精. ７􀆰３　输精器准备 输精器使用前应预热到３０℃~３６℃.将输精器推杆后退,解冻后的细管精液封口端朝外装入输精 器;用专用剪剪去封口,剪口正,断面齐;分别套上硬外管及软外套. ８　输精 ８􀆰１　输精时间 经发情鉴定,母牛确认发情后,１２h内适时输精;同期排卵Ｇ定时输精程序处理的母牛,按程序规定时 间输精. ８􀆰２　输精操作 输精人员一只手戴乳胶手套及一次性长臂手套(可在手套上涂抹润滑剂),五指并拢,呈圆锥形从肛门 进入直肠并把握住子宫颈;另一只手将输精器从阴道下口斜上方约４５°角向里轻轻插入阴道,然后平插入 子宫颈外口,撕开输精软外套,输精器通过子宫颈到达子宫体,把输精器推杆缓缓向前推出精液,然后缓慢 退出输精器. ９　证实方法 ９􀆰１　妊娠诊断 ９􀆰１􀆰１　试剂盒检测 人工授精后２８d~３２d母牛早期妊娠诊断可采用妊娠检测试剂盒.妊娠诊断方法和结果判断按照 试剂盒说明进行. ９􀆰１􀆰２　超声波检查 人工授精后３２d~３５d母牛妊娠诊断可采用B超法.B超检查时,应检测到孕体和胎儿视为妊娠. ９􀆰１􀆰３　直肠检查 人工授精后４０d~６０d母牛妊娠诊断可采用直肠检查.直肠触诊时,孕角增大且柔软,有液体波动 感视为妊娠. ９􀆰２　授精效果评定 　人工授精效果的评定可用下列指标表示: a)　情期受胎率:情期受胎率按公式(１)计算. A＝N１ N２×１００ (１) 􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺 式中: A———情期受胎率,单位为百分号(％); N１———妊娠母牛数; N２———参配母牛的情期总数. b)　２１d妊娠率:２１d妊娠率按公式(２)计算,生产中也可采用附录B的方法推算. C＝N１ N３×１００ (２) 􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺 式中: C———２１d妊娠率,单位为百分号(％); N１———妊娠母牛数,单位为头; N３———应参配母牛数,单位为头. ９􀆰３　记录 包括母牛号、母牛配次、母牛胎次、母牛发情时间、输精时间、冷冻精液信息、输精操作人员、妊娠诊断 ３NY/T１３３５—２０２２ 时间与结果、情期受胎率、２１d妊娠率等.上述内容可以表格的方式记录. ４