ICS 67.060 LS CCS B 20 中华人民共和国粮食行业标准 LS/T 6149—2024 粮油检验 谷物中黄曲霉毒素B1 测定 超导量点免疫荧光快速定量法 Superconducting quantum dot immunofluorescence method 2024-10-01 发布 2025-04-01 实施 发布 国家粮食和物资储备局 出版 中国标准出版社 LS/T 6149—2024 前言 本文件按照GB/T 1.1一2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由国家粮食和物资储备局提出。 本文件由全国粮油标准化技术委员会（SAC/TC 270)归口。 本文件起草单位：湖南省粮油产品质量监测中心、深圳市赛泰诺生物技术有限公司、北京市食品检 验研究院（北京市食品安全监控和风险评估中心）、辽宁省粮食和物资储备事务服务中心、安徽省粮油产 品质量监督检测站、江西省检验检测认证总院食品检验检测研究院、广东省粮食科学研究所有限公司、 四川省粮食质量监测中心。 本文件主要起草人：许艳霞、陈渠玲、倪小英、张晓燕、刘红梅、马志、乔丽娜、沈娜、胡斌、杨静、 彭志兵、陈威、刘向昭、黄卫、梅广、洪玲、韩煜晖、李昕阳。 1 LS/T 6149—2024 粮油检验谷物中黄曲霉毒素B测定 超导量点免疫荧光快速定量法 1范围 本文件描述了采用超导量点免疫荧光快速定量法测定谷物中黄曲霉毒素B1 的方法，规定了试剂、 仪器设备及材料、样品制备、样品测定、结果表述和重复性。 本文件适用于小麦、稻谷、玉米中黄曲霉毒素B1的快速定量检测。 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文 本文件。 GB/T 5491粮食、油料检验扦样、分样法 GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法 LS/T 6402粮油检验设备和方法标准适用性验证及结果评价一般原则 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 超导量点 superconducting quantum dot 超级半导体包被的量子点原子发光物。 4原理 试样中的黄曲霉毒素 B1抗原和固定在检测线 T线上的黄曲霉毒素 B1抗原与超导量点标记黄曲 霉毒素B1 抗体竞争反应，荧光分析仪读取的荧光信号与试样中黄曲霉毒素B1 含量成反比，根据仪器内 置曲线自动计算样品中黄曲霉毒素B1 的含量。 5 试剂 5.1磷酸氢二钠（Na²HPO4）。 5.2磷酸二氢钠（NaH²PO4）。 5.3氯化钾(KCl)。 5.4 吐温 80(C32 H6oO1o）。 5.5 甲醇(CH:OH)。 5.6稀释缓冲液:称取磷酸氢二钠（5.1)3.5 g、磷酸二氢钠(5.2)1.5 g、氯化钾（5.3)0.2 g,移取吐温 80 LS/T 6149—2024 (5.4)10 mL,超纯水溶解后定容至 1 L。 5.7提取液:取 550 mL甲醇（5.5）,加人 450 mL超纯水,混匀。 6仪器设备及材料 6.1天平:感量为0.01 g。 6.2 谷机。 6.3粉碎机：能使试样粉碎后全部通过0.85mm筛。 6.4离心机:转速不低于 4 000 r/min。 6.5涡旋振荡器。 6.6免疫荧光分析仪：能测定并显示超导量点免疫荧光定量检测卡的测定结果 6.7黄曲霉毒素 B1 超导量点免疫荧光定量检测卡：技术要求按附录 A。常温避光储存，具体储存条件 和容量参照使用说明。 6.8滤纸:中速定量滤纸。 6.9计时器。 7样品制备 7.1扦样与分样 按照GB/T 5491 执行。 7.2样品处理 7.2.1取不少于1kg的样品，稻谷样品采用碧谷机（6.2)脱壳后用粉碎机（6.3)粉碎至全部通过0.85mm 筛,其他样品直接用粉碎机（6.3)粉碎至全部通过0.85mm筛,充分混合均匀备用。 7.2.2准确称取5.00 g士0.01g混合均匀后的试样（7.2.1)于 50.0mL离心管中,加人 25.0 mL试样提 取液（5.7）,用涡旋振荡器（6.5)振荡10 min;静置 5min 后用滤纸（6.8)过滤（或取1.0mL混合液于离心 管中,经离心机（6.4)以 4 000 r/min离心3min）。取滤液或离心后的上清液100 μL于另一洁净离心管 中,加人400μL稀释缓冲液（5.6）,充分混匀待测。 注：不同厂家黄曲霉毒素B超导量点免疫荧光定量检测卡所用的样品处理方法可能不同，需按照产品使用说明中 规定的方法操作。 8样品测定 8.1开启免疫荧光分析仪（6.6）。 8.2将超导量点免疫荧光定量检测卡(6.7)从冷藏状态取出,加样孔朝上平放至室温， 8.3准确移取 75 μL待测液（7.2.2）,加人检测卡加样孔中。 8.4检测卡加样后,水平静置反应15 min,然后在 3 min 内将检测卡插免疫荧光分析仪（6.6），仪器 将自动进行检测。 8.5免疫荧光分析仪（6.6)自动完成数据读取、分析、显示并保存检测结果。 若显示值50μg/kg，则移取100μL 7.2.2中滤液或上清液,加入 300μL试样提取液（5.7）,充分混 （900 测定。 注：不同厂家免疫荧光分析仪的使用方法可能有所不同，需按照产品说明书的规定进行操作。 2 LS/T 6149—2024 结果计算和表述 黄曲霉毒素 Bl 的含量按式(1)计算。 X=fXC .（1） 式中: X 一—试样中黄曲霉毒素 Bl 的含量,单位为微克每千克（μg/kg); —一试液稀释倍数; 免疫荧光分析仪自动计算并显示的结果，单位为微克每千克（μg/kg）。 C 计算结果保留小数点后两位。 10 重复性 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不应超过算术平均值的20%。 11 检出限和定量限 方法检出限为 0.5 μg/kg,定量限为 1.5 μg/kg。 3 LS/T 6149—2024 附录A (规范性) 超导量点免疫荧光快速定量检测卡性能评价要求 A.1检出限评价 连续独立测定 20个空白样品,按 LS/T 6402的规定计算检出限,计算的检出限应不高于设备的声 称检出限。 A.2准确性评价 采用 1.5 μg/kg、10 μg/kg 和 40 μg/kg 3个含量水平的黄曲霉毒素 Bl 自然污染有证标准物质,每 个样品平行测定不低于6次。计算检测卡检测结果与标准样品的相对偏差，3个样品的相对偏差均应 控制在一20%～十20%之间。 A.3精密度评价 采用含量为 10 μg/kg 的黄曲霉毒素 Bl自然污染有证标准物质,平行测定不低于6 次,计算检测卡 批内变异系数,变异系数应<20% A.4批间稳定性评价 批次产品测定不低于2次,批内测定取其平均值,计算检测卡批间变异系数,变异系数应≤20%。 A.5批内稳定性评价 采用含量为10 μg/kg 的黄曲霉毒素 B1 自然污染有证标准物质,随机选取1个批次产品测定,平行 测定不低于6次,计算检测卡批内变异系数,变异系数应≤20%。 4 LS/T 6149—2024 附录A (规范性) 超导量点免疫荧光快速定量检测卡性能评价要求 A.1检出限评价 连续独立测定 20个空白样品,按 LS/T 6402的规定计算检出限,计算的检出限应不高于设备的声 称检出限。 A.2准确性评价 采用 1.5 μg/kg、10 μg/kg 和 40 μg/kg 3个含量水平的黄曲霉毒素 Bl 自然污染有证标准物质,每 个样品平行测定不低于6次。计算检测卡检测结果与标准样品的相对偏差，3个样品的相对偏差均应 控制在一20%～十20%之间。 A.3精密度评价 采用含量为 10 μg/kg 的黄曲霉毒素 Bl自然污染有证标准物质,平行测定不低于6 次,计算检测卡 批内变异系数,变异系数应<20% A.4批间稳定性评价 批次产品测定不低于2次,批内测定取其平均值,计算检测卡批间变异系数,变异系数应≤20%。 A.5批内稳定性评价 采用含量为10 μg/kg 的黄曲霉毒素 B1 自然污染有证标准物质,随机选取1个批次产品测定,平行 测定不低于6次,计算检测卡批内变异系数,变异系数应≤20%。 4