̾ൣयѢྟ஠ఴ˝э ICS67.060 CCSX24 中华人民共和国海关行业标准 HS/T81—2023 脱皮花生检测方法 Test method of blanched ground-nuts 2023-12-11发布 2024-01-01实施 中华人民共和国海关总署发布̾ൣयѢྟ஠ఴ˝э ̾ൣयѢྟ஠ఴ˝э 前 言 本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则》及 HS/T 1—2022《海关标准编写规则》的规定起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由中华人民共和国海关总署关税征管司提出。 本文件由中华人民共和国海关总署归口。 本文件起草单位:青岛海关技术中心、中华人民共和国广州海关、山东省花生研究所、日照海关综合 技术服务中心。 本文件主要起草人:张雪琰、牛增元、罗忻、杨珍、毛容妹、刘培海、周龙龙、陈春光、刘泉。 ⅠHS/T81—2023̾ൣयѢྟ஠ఴ˝э ̾ൣयѢྟ஠ఴ˝э 脱皮花生检测方法 警告———使用本文件的人员应有正规实验室工作的实践经验。本文件并未指出所有可能的安全问 题,使用者有责任采取适当的安全和健康措施,并保证符合国家有关法规规定的条件。 1 范围 本文件规定了干燥脱皮花生中过氧化氢酶和过氧化物酶的检测方法。 本文件适用于干燥脱皮花生中过氧化氢酶和过氧化物酶的检测。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文 件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于 本文件。 GB 5009.3 食品安全目录标准 食品中水分的测定 GB/T 601 化学试剂 标准滴定溶液的制备 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 干燥脱皮花生 dry-blanched ground-nuts 去壳花生,花生衣经加热破裂和松脱,冷却后,子仁经刷子或有凸起花纹的橡胶带去衣。 3.2 过氧化氢酶活动度(活性) catalase activity 规定条件下,一定量试样中的过氧化氢酶与过氧化氢作用所消耗的过氧化氢量,用每克试样所消耗 的过氧化氢毫克数表示。 [来源:GB/T 5522—2008,3.1,有修改] 3.3 过氧化物酶活性单位 peroxidase activity uint(U) 在25 ℃,pH7.0时,每分钟催化转化一个微摩尔量过氧化氢的酶量。 [来源:GB/T 32131—2015,3.1,有修改] 3.4 过氧化物酶活性 peroxidase activity 规定条件下,一定量试样中过氧化物酶活性单位(U)数量,用每克试样过氧化物酶活性单位数量 表示。 4 过氧化氢酶活性的测定 1HS/T81—2023̾ൣयѢྟ஠ఴ˝э 4.1 原理 在pH值7.7条件下,从样品中提取过氧化氢酶,在提取液中加入一定量的过氧化氢,使过氧化氢 在过氧化氢酶作用下分解,再用高锰酸钾溶液滴定过量的过氧化氢。根据高锰酸钾溶液的消耗量计算 出试样中过氧化氢酶活动度。 4.2 试剂和材料 除另有说明外,所用试剂均为分析纯。水为符合GB/T 6682规定的三级水。 4.2.1 2%过氧化氢溶液:取30%过氧化氢溶液2 mL,加水稀释至30 mL。 4.2.2 10%硫酸溶液:10 mL浓硫酸边滴边搅拌加入90 mL水中。 4.2.3 高锰酸钾标准溶液:c(1/5KMnO4)=0.1 mol/L,按GB/T 601配制和标定。 4.2.4 磷酸氢二钠水溶液:称取Na2HPO4·12H2O 29.9 g,加水溶解定容至1 000 mL。 4.2.5 磷酸二氢钾水溶液:称取无水KH2PO4 9.1 g,加水溶解定容至1 000 mL。 4.2.6 pH7.7 磷酸盐缓冲液:临用时,将磷酸氢二钠水溶液(4.2.4)与磷酸二氢钾水溶液(4.2.5)按 9∶1混合。 4.3 仪器和设备 4.3.1 分析天平:感量为0.01 g。 4.3.2 恒温水浴锅(或恒温培养箱):30 ℃±2 ℃。 4.3.3 具塞锥形瓶:250 mL。 4.3.4 量筒:10 mL、25 mL、100 mL。 4.3.5 移液管:5 mL、20 mL。 4.3.6 研钵。 4.3.7 滴定管:25 mL。 4.3.8 多功能粉碎机。 4.3.9 离心管:50 mL。 4.3.10 离心机。 4.3.11 样品筛:2 mm孔径。 4.3.12 摇床:300 r/min。 4.3.13 电炉。 4.3.14 滤纸:中速。 4.4 试验步骤 4.4.1 样品处理 将干燥脱皮花生样品混合均匀,倒入粉碎机粉碎,过2 mm孔径样品筛,收集筛下样品。 4.4.2 过氧化氢酶的提取 称取过筛后样品约1 g,精确至0.01 g,倒入研钵,研磨至无粗粒,量取pH值7.7 磷酸盐缓冲液 (4.2.6)50 mL ,先加入少量以润湿样品,细磨至糊状后,小心转移至50 mL离心管中,剩余缓冲液分多 次洗净研钵,洗液并入50 mL离心管中,剧烈振摇10 min,5 000 r/min离心5 min,用滤纸全部过滤。 4.4.3 过氧化氢酶活性的测定 准确移取20 mL滤液于250 mL锥形瓶中,加入20 mL水和3 mL 2%过氧化氢溶液(4.2.1),摇 2HS/T81—2023̾ൣयѢྟ஠ఴ˝э 匀,30 ℃恒温水浴锅中水浴15 min,取出,加入5 mL 10%硫酸溶液(4.2.2),摇匀,用0.1 mol/L高锰 酸钾标准滴定溶液(4.2.3)滴定剩余的过氧化氢,至溶液呈粉红色,记录消耗高锰酸钾标准溶液体积。 4.4.4 空白试验 吸取20 mL滤液于250 mL锥形瓶中,直接煮沸1 min。冷却后加入20 mL水和3 mL 2%过氧化 氢溶液(4.2.1),摇匀,30 ℃恒温水浴锅中水浴15 min,取出,加入5 mL 10%硫酸溶液(4.2.2),摇匀, 用0.1 mol/L高锰酸钾标准滴定溶液(4.2.3)滴定剩余的过氧化氢,至溶液呈粉红色,记录消耗高锰酸 钾标准溶液体积。 4.5 结果计算 过氧化氢酶活性(X1)按公式(1)计算: X1=(V0-V1)×c m×8.5×50 20…………………………( 1 ) 式中: X1———过氧化氢酶活性(以过氧化氢计),单位为毫克每克(mg/g); V0———空白试验用去高锰酸钾体积,单位为毫升(mL); V1———样品滴定用去高锰酸钾体积,单位为毫升(mL); c———高锰酸钾标准溶液浓度,单位为摩尔每升(mol/L); m———试样的质量,单位为克(g); 8.5———与1.00 mL高锰酸钾标准溶液[c(1/5KMnO4)=0.1 mol/L]相当的H2O2的质量(以过 氧化氢计),单位为毫克每摩尔(mg/mol)。 实际样品检测示例见附录A。 4.6 重复性 相同的试验材料,用同样的方法,在同一实验室由同一操作人员在较短的时间间隔内获得的两个独 立的测定结果之间绝对差值不得超过其算术平均值的10%。 5 过氧化物酶活性的测定 5.1 原理 过氧化物酶能迅速催化过氧化氢氧化愈创木酚(又名邻甲氧基苯酚,化学式:C7H8O2)生成棕色的 四邻甲氧基连酚,通过436 nm 处吸光度值的变化计算其酶活性。 反应式为: 3HS/T81—2023̾ൣयѢྟ஠ఴ˝э 5.2 试剂和材料 除另有说明外,所用试剂均为分析纯。水为符合GB/T 6682规定的三级水。 5.2.1 0.1 mol/L磷酸二氢钠:称取NaH2PO4·2H2O 15.6 g,加水溶解定容至1 000 mL。 5.2.2 0.1 mol/L磷酸氢二钠:称取Na2HPO4·12H2O 35.8 g,加水溶解定容至1 000 mL。 5.2.3 0.1 mol/L pH7.0 磷酸盐缓冲液:量取38 mL 0.1 mol/L磷酸二氢钠(5.2.1)、62 mL 0.1 mol/ L磷酸氢二钠(5.2.2)混匀 。 5.2.4 80 mmol/L 愈创木酚水溶液:量取0.88 mL 愈创木酚用水定容至100 mL。 5.2.5 40 mmol/L 过氧化氢水溶液:量取0.41 mL 30%过氧化氢用水定容至100 mL。 5.3 仪器和设备 5.3.1 分光光度计。 5.3.2 分析天平:感量为0.01 g。 5.3.3 恒温水浴锅(或恒温培养箱):25 ℃±2 ℃。 5.3.4 样品筛:2 mm孔径。 5.3.5 研钵。 5.3.6 移液枪:100 μL、1 mL、5 mL。 5.3.7 离心管:50 mL。 5.3.8 离心机。 5.3.9 摇床:300 r/min。 5.3.10 比色皿:1 cm。 5.3.11 多功能粉碎机。 5.3.12 滤纸:中速。 5.4 试验步骤 5.4.1 样品处理 见4.4.1。 5.4.2 过氧化物酶的提取 称取过筛后样品约1 g,精确至0.01 g,倒入研钵,研磨至无粗粒,吸取pH 7.0 磷酸盐缓冲液 (5.2.3)5 mL ,先