ICS 67.180.10 CCS X31 中 华 人 民 共 和 国 供 销 合 作 行 业 标 准 GH/T 1393—2022 GH 蜂蜜中阿洛酮糖 含量的测定 高效液相色谱 法 Determination of psicose in Honey — High performance liquid chromatography method 2023 -02-09发布 2023 - 03- 01实施 中华全国供销合作总社 发布 GH/T 1393 —2022 1 前 言 本文件按照GB/T 1.1 -2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的 规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由中华全国供销合作总社提出。 本文件由全国蜂产品标准化工作组（ SAC/SWG2 ）归口。 本文件起草单位：秦皇岛海关技术中心 、南京海关动植物与食品检测中心、 上海冠生园蜂制品有限 公司、中国蜂产品协会 。 本文件主要起草人：崔宗岩、黄学者、 陈磊、祖铁红、 刘晓茂、 殷耀、丁涛、贾光群、王艳、刘彩 萍、李云龙、 谭丽蕊、张进杰、曹彦忠。 GH/T 1393 —2022 2 蜂蜜中阿洛酮糖含量的测定 高效液相色谱法 1 范围 本文件规定了蜂蜜中阿洛酮糖含量测定的高效液相色谱 -蒸发光检测法。 本文件适用于蜂蜜中阿洛酮糖含量的测定。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 原理 试样用水溶解，乙腈定容后，经过滤，液相色谱 -蒸发光散射检测法测定，外标法定量。 5 试剂和材料 除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为符合 GB/T 6682 规定的一级水。 5.1 乙腈：色谱纯。 5.2 三乙胺：优级纯。 5.3 0.1%三乙胺 -乙腈溶液 ：取1 mL三乙胺（5.2）于 1000 mL 容量瓶中，用乙腈（ 5.1）稀释并定容 ， 摇匀。 5.4 乙腈水溶液（ 40：60，v/v） ：准确量取 40 mL乙腈（ 5.1）置于 100 mL容量瓶中，用水定容，摇匀。 5.5 阿洛酮糖 （Psicose，C6H12O6，CAS号： 551-68-8），纯度 ≥98%。 5.6 阿洛酮糖标准储备溶液：称取 100 mg阿洛酮糖标准物质（ 5.5） （精确至 0.1 mg） ，置于 10 mL容量 瓶中， 加入 6 mL水溶解， 用乙腈定容， 摇匀。 阿洛酮糖储备液浓度为 1 g/100mL 。 该储备液储存在 2-8 ℃ 条件下，有效期 6个月。 5.7 阿洛酮糖 标准工作溶液：分别吸取 阿洛酮糖 标准储备溶液（ 5.6）50 μL、100 μL、200 μL、500 μL、 1000 μL至10mL容量瓶中，用乙腈水 溶液（5.4）定容，分别配制成 0.005 g/100mL 、0.01 g/100mL 、0.02 g/100mL、0.05 g/100mL 、0.1 g/100mL 浓度的阿洛酮糖 标准工作溶液，用于绘制标准工作曲线。该工作 溶液现用现配。 6 仪器和设备 GH/T 1393 —2022 3 6.1 高效液相色谱仪：配有蒸发光散射检测器。 6.2 分析天平：感量 0.01 g和0.000 1 g。 6.3 微量可调移液器：量程 100 µL、1000 µL。 6.4 过滤膜： 有机系，0.22 µm。 6.5 容量瓶： 10 mL、100 mL。 7 试样制备与保存 7.1 试样的制备 对无结晶的实验室样品，将其搅拌均匀。对有结晶的样品，在密闭情况下，置于不超过 60 ℃的水 浴中温热，振荡，待样品全部融化后搅匀，冷却至室温。分出 不少于 200 g作为试样。制备好的试样置 于样品瓶中，密封，并做上标记。 7.2 试样的保存 试样于常温下保存。 8 测定步骤 8.1 样品前处理 称取 5 g试样 （精确至 0.01g） 置于 100 mL烧杯中， 加入 30 mL水， 用玻璃棒搅拌使试样完全溶解， 转移至 100 mL容量瓶（ 6.5）中，再用 10 mL水洗烧杯 和玻璃棒 并转移至上述容量瓶中，重复 3次，用 乙腈定容，混匀。用 0.22 μm滤膜（ 6.4）过滤后待测。 8.2 测定 8.2.1 液相色谱参考条件 a) 色谱柱： Amide（2.1 mm × 150 mm , 1.7 μm），或相当者； b) 流动相： 0.1 %三乙胺 -乙腈溶液 （5.3）+水，梯度洗脱条件见表 1； c) 柱温： 60 ℃； d) 漂移管温度： 55 ℃； e) 气体压力： 30 psi； f) 喷雾器模式：加热，动力水平为 60 %； g) 进样量： 3 µ L。 表1 梯度洗脱条件 （A，0.1 %三乙胺-乙腈溶液； B，水） 时间（ min） 流速（ mL/min） A (%) B (%) 0 0.25 90 10 5 0.25 90 10 10 0.25 65 35 16 0.25 65 35 17 0.25 90 10 23 0.25 90 10 8.2.2 液相色谱测定 将阿洛酮糖 标准工作液（ 5.7）按照上述色谱条件上机测定，记录色谱峰峰面积，以峰面积为纵坐GH/T 1393 —2022 4 标，以标准工作溶液浓度为横坐标，采用幂函数方程绘制标准曲线。在上述色谱条件下， 阿洛酮糖 的参 考保留时间为 4.8 min，色谱图参见附录 A.1。 8.3 平行试验 按以上步骤，对同一试样进行平行试验测定。 8.4 空白试验 除不称取样品外，均按上述步骤进行。 9 结果计算 结果按式 （1）计算： X = C × V ……………… （1） m 式中： X—试样中被测组分含量，单位为克每 一百克（ g/100g）； C—从标准工作曲线上得到的被测组分溶液浓度，单位为克每百毫升（ g/100mL）； V—样品溶液定容体积， 单位为毫升（ mL）； m—所称试样的质量，单位为克（ g）。 注：计算结果应扣除空白值 ；结果保留 2位有效数字。 10 定量限 本文件中阿洛酮糖 的定量限为 0.1 g/100g。 11 精密度 平行试验两次测 定的绝对差值不超过其算数平均值的 10 %。 GH/T 1393 —2022 5 附 录 A （资料性） 阿洛酮糖 标准工作溶液和代表性添加 阿洛酮糖 样品的液相色谱 -蒸发光检测色谱图 A.1 阿洛酮糖 标准工作溶液的液相色谱 -蒸发光检测色谱图参见图 A.1 a；代表性 添加阿洛酮糖样品的液 相色谱 -蒸发光检测色谱图 参见图 A.1 b。 （A.1 a） （A.1 b） 图A.1 阿洛酮糖标准 工作溶液 （a，浓度为 0.05 g/100mL ）和代表性添加样品（ b，荆条蜜，添加量 为1.0 g/100g ）的液相色谱 -蒸发光检测色谱图 Psicose - 4.781LSU 0.002.004.006.008.0010.0012.0014.0016.0018.0020.0022.00 分钟0.00 2.00 4.00 6.00 8.00 10.00 12.00 14.00 Psicose - 4.785LSU 0.003.006.009.0012.0015.0018.0021.0024.0027.0030.0033.00 分钟0.00 2.00 4.00 6.00 8.00 10.00 12.00 14.00