ICS 65.020.30 CCS B 43 0B65 新疆维吾尔自治区地方标准 DB65/T4800-—2024 绵羊微创活体采卵技术操作规程 Code of practice for minimal invasive ovum pick-up in sheep 2024-07-11发布 2024－09－10实施 新疆维吾尔自治区市场监督管理局 发布 DB65/T 4800—2024 前言 本文件按照GB/T1.1一2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件由新疆维吾尔自治区畜牧兽医局提出、归口并组织实施。 本文件起草单位：新疆畜牧科学院生物技术研究所、新疆畜牧科学院畜牧研究所、新疆上品美羊科 技有限公司。 本文件主要起草人：汪立芹、林嘉鹏、李亮、汪建国、吴阳升、郝耿、陈莹、牛志刚、李杰、薛利、 梁红艳、刘志强、史洪才。 本文件实施应用中的疑问，请咨询新疆畜牧科学院生物技术研究所。 对文件的修改意见建议，请反馈至新疆维吾尔自治区畜牧兽医局（乌鲁木齐市新华南路408号）、 新疆畜牧科学院生物技术研究所（乌鲁木齐市经济技术开发区阿里山街468号）、新疆维吾尔自治区市 场监督管理局（乌鲁木齐市新华南路167号）。 新疆维吾尔自治区畜牧兽医局联系电话：0991-8568089；传真0991-8527722；邮编：830004 新疆畜牧科学院生物技术研究所联系电话：0991-3075299；传真：0991-3075270；邮编：830022 新疆维吾尔自治区市场监督管理局联系电话：0991-2818750；传真0991-2311250；·邮编：830004 DB65/T4800—2024 绵羊微创活体采卵技术操作规程 1范围 本文件规定了绵羊微创活体采卵的技术操作程序，规定了供体的选择、供体激素处理、供体微创活 体采卵和卵母细胞收集技术的要求。 本文件适用于绵羊微创活体采卵技术操作。 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 NY/T1571羊胚胎移植技术规程 DB65/T4073成年绵羊体外胚胎生产技术操作规程 DB65/T4204绵羊幼羔体外胚胎生产技术操作规程 DB65/T4497绵羊腹腔镜定时输精技术操作规程 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3. 1 绵羊微创活体采卵minimal invasive ovumpick-up in sheep 使用促卵泡素对供体母羊进行处理，利用腹腔镜进行微创活体卵母细胞采集、收集和洗涤等一系列 操作的技术。 4＇供体的选择 选择体质健壮、骠情适中、无遗传疾病、生殖系统疾病和传染性疫病、年龄在10月龄至5岁的母羊， 作为卵母细胞采集的供体。重复采卵的供体，应间隔2周以上。 5供体激素处理 5.1药品及器材 所需药品及器材按照NY/T1571、DB65/T4073、DB65/T4204和DB65/T4497的规定执行。 5.2供体激素处理方法 5.2.1供体母羊放置阴道海绵栓或CIDR，记为0d，9d开始肌肉注射FSH（促卵泡素），早、晚间隔 1 DB65/T 4800—2024 约12h各注射1次，连续3:d，共6次。FSH注射时间及剂量见附录A。 5.2.2注射第6针后间隔12h，对供体进行微创活体采集卵母细胞，操作完成后取出海绵栓 6供体微创活体采卵 6.1术前准备 6.1.1供体微创活体采卵前24h应禁饮禁食。 6.1.2将手术室及手术器具清洁消毒，室温维持在20℃～25℃。 6.1.3供体仰卧手术架上并保定，按照每1kg体重0.1mg～0.3mg的用量肌肉注射静松灵。 6.1.4确定腹腔镜打孔部位在离乳房前端约5cm处。 6.1.5刮去打孔部位的羊毛，用加有新洁尔灭的消毒水将备皮部位清洗干净。 6.1.6用2%～4%的碘酒涂抹打孔部位消毒5min，再用75%的酒精脱碘。 6.2微创采卵 6.2.1将采卵针通过导管连接到试管上，试管内提前加入3mL抽卵液。 6.2.2将供体未刮毛部位用创布覆盖并固定；使用8mm穿刺器分别在距离乳房5cm腹中线的左侧、 中间和右侧各穿刺一小孔，左侧孔插入腹腔镜光源，中间孔插入采卵针，右侧孔插入抓钳。 6.2.3操作人员使用腹腔镜找到卵巢，用抓钳将其固定。 6.2.4打开负压泵（压力宜在1MPa～1.5MPa），采卵针对准卵泡刺入，卵泡凹陷，卵泡液及卵母细 胞顺导管吸入收集试管。 6.2.5连续采集4个～6个卵泡后，抽出采卵针，吸取抽卵液洗涤采卵针和导管，一并回收到试管中。 6.3供体术后处理 供体进行微创采卵后，应对伤口进行消毒处理，并观察供体进食等活动状况。 7卵母细胞的收集 7.1弃去试管内卵泡液上清，留约2mL沉淀液。 7.2倒入60mm培养血内，用抽卵液洗涤试管底部3次，一并倒入培养血，在体视显微镜下捡出所有 卵母细胞，放入装有3mL抽卵液的35mm培养血内。 7.3卵母细胞的收集所需药品及器材按照DB65/T4073的规定执行。 2 DB65/T4800-—2024 附录A (资料性） FSH注射时间及剂量 FSH注射时间及剂量见表A.1。 表A.1 注射时间及剂量 放栓时间 p o p 6 10 d 11 d 12 d 早 2 mL (100 mg) 1.5 mL (75 mg) 1 mL(50 mg) 微创活体采卵、 放置海绵栓或CIDR 晚 2mL（100mg) 1.5mL(75mg) 1mL(50mg) 取出海绵栓 注1：本表以FSH总剂量450mg为例： (2 mL+1.5 mL+1 mL)×2×50 mg/mL=450 mg。 注2：FSH（500mg/瓶）加入10mL0.9%生理盐水稀释成50mg/mL。 3