3708ICS65.020.20 CCSB05 3708 济宁市地方标准 DB3708/T51-2024 液体菌种生产技术规程第1部分：真姬菇 Productiontechnicalcodeofliquidspawn ——Part1：hypsizygusmarmoreus 2024-08-26发布 2024-09-26实施 济宁市市场监督管理局 发布DB3708/T51—2024 II前言 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规 定起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由济宁市农业农村局提出、归口并组织实施。DB3708/T51—2024 III引言 食用菌是可食用的大型真菌的统称，如真姬菇、香菇、木耳、金针菇等。食用菌栽培使用的菌种是 人工培育的纯菌丝体及其培养基的混合体，根据不同的培养基质又可分为固体菌种和液体菌种。不同食 用菌的生物学特性不同，菌种生产条件差异较大，单一文件不能涵盖所有食用菌种类，为了规范我市食 用菌液体菌种生产和使用，确保我市食用菌生产持续健康发展，特制定液体菌种生产技术系列规程，本 文件为该系列规程的第一部分。DB3708/T51—2024 1液体菌种生产技术规程第1部分：真姬菇 1范围 本文件规定了真姬菇液体菌种生产的人员要求、生产环境、生产设施与设备、生产技术要求、液体 菌种质量要求、菌种保存、生产档案等要求。 本文件适用于真姬菇液体菌种的制备。 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T150（所有部分）压力容器 GB3095环境空气质量标准 GB5749生活饮用水卫生标准 GB/T12728-2006食用菌术语 GB19298食品安全国家标准包装饮用水 GB50073洁净厂房设计规范(附条文说明） NY/T528食用菌菌种生产技术规程 NY/T1846食用菌菌种检验规程 3术语和定义 GB/T12728界定的以及下列术语和定义适用于本文件。 3.1 真姬菇hypsizygusmarmoreus 属担子菌亚门、层菌纲、伞菌目、白蘑科、玉蕈属，外形美观，质地脆嫩，味道鲜美，具有海蟹味， 又名玉蕈、斑玉蕈。目前我国市场上有“蟹味菇”“白玉菇”“海鲜菇”3个品系。 3.2 母种stockculture 经各种方法选育得到的具有结实性的菌丝体纯培养物及其继代培养物，也称一级种、试管种。 [来源：GB/T12728-2006，2.5.7] 3.3 液体菌种liquidspawn 在摇瓶和发酵罐中通过液体发酵技术生产的液体形态的食用菌菌种。 3.4 空气压缩机aircompressorDB3708/T51—2024 2为液体菌种生产提供压缩空气的设备。 3.5 空气过滤系统airfiltrationsystem 对液体菌种生产所用空气中的油、水、杂质和杂菌等进行过滤，达到无菌洁净要求的设备，一般包 括冷冻干燥机、吸附式干燥机、过滤器等。 3.6 罐压tankpressure 液体菌种生产过程中发酵罐内保持的空气压力，单位：MPa。 3.7 通气率aerationrate 液体菌种培养过程中每分钟通入发酵罐中无菌空气体积与实际发酵液体积的比值。用vvm（每分 钟通入无菌空气体积/发酵液体积）表示。 3.8 接种量inoculationamount 接入的菌种体积与培养基体积的比值，用%表示。 3.9 液体菌种菌龄cellageofliquidspawn 菌种接入培养基开始计算的液体菌种培养时间，用d表示。 3.10 发酵罐空消sterilizationforemptyfermenter 对尚未加培养基的空发酵罐进行高压蒸汽灭菌。 3.11 投料addingculturemedium 将配制好的培养基投放到发酵罐中。 3.12 定容constantvolume 培养器中加入培养基后，加水至所要求体积。 3.13 发酵罐实消sterilizationforfermenter 指对投料后的发酵罐进行高压蒸汽灭菌。 4人员要求 工作人员应熟练掌握菌种生产所需的专业技术，并注意保持个人卫生。进入净化车间应穿戴经清洗 干净且消毒处理符合进入净化车间要求的工作服、口罩、鞋、帽等。 5生产环境 5.1环境要求 环境空气质量应符合GB3095要求。配制培养基用水宜使用纯净水，纯净水应符合GB19298要求。 其他生产用水应符合GB5749要求。 5.2生产场地、厂房设置和布局DB3708/T51—2024 3生产场地、厂房设置和布局应符合NY/T528的要求。增设摇瓶菌种培养室、发酵罐菌种培养室。 净化车间应符合GB50073的要求。 6生产设施与设备 生产应具备NY/T528规定的相关设施设备，还应增加摇床、发酵罐系统。压力容器应使用经有资 质部门生产与检验的安全合格产品，符合GB/T150（所有部分）的规定。 7生产技术要求 7.1工艺流程 真姬菇液体菌种生产工艺见图1。 图１真姬菇液体菌种生产工艺流程 7.2品种选择 从具有相应资质的供种单位引种，且种性清楚。引种后应进行适应性出菇试验验证，选用高产、优 质、抗逆性强的真姬菇品种。 7.3母种生产 7.3.1容器 使用18mm×180mm或20mm×200mm玻璃试管，试管应保持清洁、干燥。试管塞为棉塞（梳 棉或化纤棉）或硅胶塞。DB3708/T51—2024 47.3.2培养基配方 马铃薯200g/L（煮汁），麦麸20g/L（煮汁），葡萄糖20g/L，酵母浸粉3g/L，磷酸二氢钾1g/L， 硫酸镁0.5g/L，琼脂20g/L，纯净水1000mL。 7.3.3培养基配制 以配制1000mL培养基为例。选无青皮、未发芽的新鲜马铃薯洗净、去皮、去芽眼，切成薄片， 加水1000mL左右，麦麸用纱布包裹，与马铃薯共同煮20min～30min，用预湿的4层纱布过滤。取滤 液加入20g琼脂，边煮边搅拌至琼脂全部融化。加入其它配料搅拌溶化，加水定容至1000mL。趁热 分装，装量为试管长度的1/5～1/4，管口不能粘上培养基。 7.3.4培养基灭菌 将分装好的试管直立放入灭菌锅内，用牛皮纸包住试管塞，锅内留有一定的空隙。检查锅内水位， 及时灭菌。压力升到0.05MPa时，打开放气阀排除冷空气，如此重复一次。压力升至0.1MPa～0.12MPa， 恒压35min～40min。 7.3.5摆斜面 灭菌结束，自然降压至零。打开锅盖，利用余热烘干试管塞，将试管的一端斜放在1cm厚的木条 上摆出斜面，斜面顶端距试管口不少于50mm。 7.3.6接种培养 检查、核对菌种。于消毒后的接种箱或超净工作台上，用经火焰消毒并冷却后的接种针切取（3～5） mm×（3～5）mm的一块母种迅速转接于待接种试管斜面中央，接完种及时贴好标签，置于18℃～ 20℃的恒温培养箱内培养。接种后2d～3d，观察发菌情况，及时检出杂菌污染、长势不良的试管。 一般培养10d～14d、菌丝长满斜面后，及时使用或置于0℃～4℃冰箱中保存。 7.3.7母种质量要求 菌丝白色、整齐、均匀、无角变、粉孢子少、无杂菌，生活力强，培养基不萎缩。应符合NY/T1846 要求。 7.4摇瓶液体菌种生产 7.4.1容器 使用1000mL无色或近无色专用玻璃菌种瓶，瓶塞为棉塞（梳棉或化纤棉）或硅胶塞或专用封口 透气膜。 7.4.2培养基配方 蟹味菇配方：马铃薯200g/L（煮汁），葡萄糖20g/L，玉米粉20g/L，酵母浸粉3g/L，磷酸二氢 钾1g/L，硫酸镁0.5g/L，纯净水1000mL。 海鲜菇配方：马铃薯200g/L，葡萄糖10g/L，蛋白胨4g/L，硫酸镁1g/L，磷酸二氢钾2g/L， 纯净水1000mL。 白玉菇配方：蔗糖20g/L，豆粕粉3g/L，硫酸镁0.6g/L，磷酸氢二钾0.25g/L，磷酸二氢钾0.5g/L， 纯净水1000mL。 7.4.3培养基配制DB3708/T51—2024 5以配制1000mL培养基为例。蟹味菇、海鲜菇：选无青皮、未发芽的新鲜马铃薯洗净、去皮、去 芽眼，切成薄片，加水1000mL左右，煮20min～30min，用预湿的4层纱布过滤、定容至1000mL。 玉米粉提前用温水搅拌均匀，不能有结块，加入滤液中煮沸，再加入其余的原料至溶解。培养基分装入 摇瓶中，装液量为摇瓶容量的2/5～3/5，将瓶口用棉塞或硅胶塞或专用透气封口膜封口，并用牛皮纸包 扎。白玉菇：按配方比例称取原料加水搅拌均匀，分装入摇瓶中，装液量为摇甁容量的2/5～3/5，将瓶 口用棉塞或硅胶塞或专用透气封口膜封口，并用牛皮纸包扎。 7.4.4灭菌 按7.3.4要求执行。 7.4.5接种培养 检查、核对菌种。待培养基冷却后于消毒过的接种箱或超净工作台上，用经火焰消毒并冷却后的接 种针切取（3～5）mm×（3～5）mm的一块母种迅速转接于待接种摇瓶培养基内，每瓶接种5～6块。 接种结束后封口，置摇床上震荡培养，摇床温度控制在21℃～22℃，震荡频率为150rpm～180rpm， 培养时间6d～7d。 7.4.6摇瓶液体菌种检验 每日检查菌液颜色、菌球形态和气味，及时检出浑浊、异味、泡沫异常的不合格菌种。 7.4.7摇瓶菌种质量要求 菌液澄清，不浑浊，无杂菌、无异味；镜检无杂菌、菌丝形态光滑、丰满；菌丝球、菌丝片段密集， 静置10min～15min，菌丝球体积占比不低于整个菌液的80%，可结束