ICS 65.020.20 CCS B 05 34 安徽省 地方 标准 DB34/T 4831—2024 亳菊组培快繁与脱毒技术规程 Technical regulations for tissue culture rapid propagation and detoxification of Dendranthema morifolium (Ramat.) Tzvel. ‘Boju’ cv. nov. 2024 - 07 - 30发布 2024 - 08 - 30实施 安徽省市场监督管理局 发布 DB34/T 4831 —2024 I 前言 本文件按照 GB/T 1.1 —2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由安徽农业大学提出。 本文件由安徽省农业农村厅归口。 本文件起草单位：安徽农业大学、亳州兴禾农业发展有限公司。 本文件主要起草人：高俊山、刘凯、李大辉、赵梦茹、黄举飞、李卫文、周雪娟、陈情情、郭宁、 杨忠、刘威、牛岩岩、陈娜。 DB34/T 4831 —2024 1 亳菊组培快繁与脱毒技术规程 1 范围 本文件规定了亳菊（ Dendranthema morifolium (Ramat.) Tzvel. ‘Boju’cv.nov.）组培快繁与脱 毒技术规程中的术语和定义、外植体选择、消毒灭菌、茎尖脱毒、病毒检测、增殖培养、生根培养、炼 苗、移栽、苗床管理及包装运输。 本文件适用于亳菊工厂化组培脱毒苗生产。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 NY/T 406 -2000 脱毒草莓种苗病毒检测技术规程 《中华人民共和国药典》（一部） 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 亳菊 Dendranthema morifolium (Ramat.) Tzvel. ‘Boju’cv.nov. 亳菊是《中华人民共和国药典》（一部）收录的中药材，为菊科植物菊的干燥头 状花序，呈倒圆锥 形或圆筒形，直径 1.5 cm～3 cm，舌状花数层，位于外围，类白色，纵向折缩，管状花多数，位于中央， 黄色，顶端 5齿裂，原产地安徽亳州，是我国 5大药用菊花之一。 外植体 explant 从自然生长的活体植物上获取的用于植物离体培养的起始材料。 脱毒 detoxification 是指通过特定的植物脱毒技术手段，如高温处理或茎尖组织培养等方法，去除或显著降低植物体内 的病毒。 试管苗 test-tube plantlet 经过组织培养获得的幼苗，是组织培养中炼苗前的幼嫩植株。 4 试管苗培养 外植体选择 选取生长健壮、无病虫害的亳菊植株，切取 1 cm～2 cm的嫩茎作为外植体。 DB34/T 4831 —2024 2 消毒灭菌 先在流水下冲洗 30 min，然后移至超净工作台。将嫩茎置于无菌瓶中，倒入适量 75% 乙醇，使嫩 茎浸泡并振荡无菌瓶消毒 30 s，迅速倒出酒精，用适量无菌水冲洗 3 次，然后用 1% 次氯酸钠浸泡约 10 min，期间不断振荡，倒出废液后用无菌水冲洗嫩茎（ 4～5）次，静置待用。 茎尖脱毒 取消毒处理后的亳菊嫩茎在显微镜下切取 0.5 mm以下茎尖， 接种至起动培养基 （ MS+6-BA 1.0 mg/L+ NAA 0.1 mg/L+ 蔗糖25 g/L+琼脂6 g/L，pH 5.8）上进行培养，培养条件为温度（ 25±2）℃、光照 16 h/d、 光照强度（ 1500～2000）lx的培养室中培养，待苗长到 5 cm以上时进行增殖培养。 病毒检测 遵照 NY/T 406-2000 脱毒草莓种苗病毒检测技术规程，对即将增殖培养的单株幼苗进行病毒检测。 采用特异性引物 PCR法对亳菊组培苗中的 TAV、CMV、CVB、CVR、TSWV、CSVD等病毒进行检测，对于病毒 检测符合要求的幼苗进行增殖培养。 增殖培养 将经过启动培养获得的组培苗切成 1.5 cm～2 cm带有（2～3）个叶片的茎段，接种至增殖培养基 （MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L+ 蔗糖25 g/L+琼脂6 g/L，pH 5.8）上进行增殖培养，培养条件为温 度（25±2）℃、光照 16h/d、光照强度 （2200～4000）lx的培养室中培养， 25 d左右可进行生根培养。 生根培养 将增殖培养获得的高度约为 7 cm～8 cm的亳菊丛芽分离成单株，并切成 3 cm～ 4 cm带有（3～4） 个叶片的茎段，接种至生根培养基（ 1/2MS + IBA 0.03 mg/L+NAA 0.01 mg/L+ 蔗糖40 g/L+琼脂6 g/L+ 活性炭3 g/L，pH 5.8）上进行生根培养，培养条件为温度 （25±2）℃、光照 16 h/d、光照强度 （2200～ 4000）lx的培养室中培养，苗高 6 cm～8 cm，根系 5 条以上时即可 炼苗。 5 炼苗 将组培瓶中生长健壮、叶色正绿、叶片平展、株高 4 cm～6 cm、根长2 cm～4 cm、叶片（ 5～6）片 的亳菊完整植株从培养室移置温室进行强光炼苗 3 d～5 d，然后开瓶炼苗 1 d～2 d，并每天喷水（ 1～2） 次。 6 移栽 基质准备 因地制宜选择基质种类，基质参考配比为草炭土 :珍珠岩:蛭石=8：1：1，基质装入育苗盘中压紧待 用。 洗苗 在清洁的容器中加入适量的水，轻轻取出炼苗后的试管苗，清洗（ 2～3）遍，洗净根部附着的培养 基且尽量不要伤苗。 DB34/T 4831 —2024 3 移栽 将洗净的试管苗栽入育苗盘中，填土轻轻按平， 株行距 2 cm×4 cm。 7 苗床管理 遮阳 移栽后，用遮阳率为 75% 左右的遮阳网遮阳不少于 7 d，温度保持 10 ℃以上。 水肥管理 根据温室条件适时浇水，保持基质含水量 50% ～ 60%，7 d后按每亩 40 kg喷施矿源黄腐酸钾 1000 倍液，以后每隔 10 d按每亩40 kg喷施复合肥（ N:P:K=15:15:15 ）1000倍液。 病害防治 移栽初期， 结合浇水喷洒枯草芽孢杆菌 2000 倍液。7 d后每隔 10 d喷洒枯草芽孢杆菌 1000 倍液， 共 2 次。 8 包装、运输 脱毒苗标准 植株整齐健壮，苗高 6 cm ～ 8 cm，根系完整且发达，无变异，无病毒。 包装 栽有脱毒苗的育苗盘应装在与尺寸相应的纸箱内，每层育苗盘间应用纸托盘隔开。箱体上应带有透 气孔，在包装箱上贴上标签，注明脱毒苗、数量、生产单位和日期。 运输 装车时切勿倒置，运输过程避免日晒、雨淋，温度保持在 10 ℃～ 15 ℃为宜。