ICS 67.120.99 CCS B 45 34 安徽省 地方 标准 DB34/T 1373—2025 代替 DB34/T 1373-2011 动物组织中氯丙嗪的残留测定 酶联免疫 吸附法 Determination of chlorpromazine residues in animal tissues Enzyme -linked immunosorbent assay 2025 - 01 - 24发布 2025 - 02 - 24实施 安徽省市场监督管理局 发布 DB34/T 1373 —2025 I 前言 本文件按照 GB/T 1.1 —2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件代替 DB34/T 1373-2011《动物组织中 氯丙嗪的残留测定 酶联免疫吸附法》，与 DB34/T 1373-2011 相比，除结构调整和编辑性修改外，主要技术变化如下： a) 增加了“禽蛋中氯丙嗪 检测范围”（见第1章）； b) 增加了“术语和定义”（见 第3章）； c) 更改了“试样制备”（见7.1，2011版的7.1）； d) 增加了“禽蛋”制备方法（见7.1.2）； e) 更改了“测定步骤 ”（见第8章，2011版的第7章）； f) 更改了“结果判定和表述 ”（见第9章，2011版的第8章）； g) 更改了“检测方法 灵敏度、准确度、精密度”（ 见第10章，2011版的第9章）； h) 增加了“资料性附录 ”氯丙嗪酶联免疫吸附法试剂盒组成 （见附录A）。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由 安徽省兽药饲料监察所 提出。 本文件由 安徽省农业农村厅 归口。 本文件起草单位： 安徽省兽药饲料监察所 、安徽中青检验检测有限公司、安徽赛如分析检测科技有 限公司、安徽科博产品检测研究院有限公司、合 肥市农业经济技术服务管理总站、安徽省水产技术推广 总站。 本文件主要起草人： 刘发全、 汪秀娟、魏涛、王伟、商鲁宁、陈斌、吴昊、许世富、王媛媛 、程莹、 林赤瑜。 本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为： —— 2011年首次发布为 DB34/T 1373-2011，2025年第一次修订。 DB34/T 1373 —2025 1 动物组织中氯丙嗪的残留测定 酶联免疫吸附法 1 范围 本文件规定了畜禽肌肉、肝脏、肾脏和禽蛋中氯丙嗪残留量的酶联免疫吸附测定方法。 本文件适用于畜禽肌肉、肝脏、肾脏和禽蛋中氯丙嗪残留量的快速筛选测定。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 33411 酶联免疫分析试剂盒通 则 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 原理 残留在畜禽肌肉、肝脏、肾脏和禽蛋中 的氯丙嗪经三氯乙酸溶液、乙腈溶液提 取后用于酶联免疫测 定。试样中的氯丙嗪与包被于微孔板中的抗原同特异性抗体进行竞争性免疫反应，加入一定量的显色底 物和终止液，在 450 nm 处测定吸光度值，在一定浓度范围内，试样中氯丙嗪的含量与吸光度大小成反 比，换算后可以获得样本中氯丙嗪的残留量。 5 试剂和材料 除非另有说明，本法所用试剂均为分析纯，水为符合 GB/T 6682 的二级水。 氯丙嗪酶联免疫试剂盒 ，应符合 GB/T 33411 的规定，组成见附录 A。 乙腈。 正己烷。 三氯乙酸溶液 （2.5％）：称取 2.5 g三氯乙酸，加入 100 mL水，搅拌至完全溶解。 氢氧化钠溶液 （12％）：称取 12.0 g氢氧化钠加入 100 mL水，溶解混匀。 6 仪器和设 备 酶标仪：测定波长 450 nm。 分析天平：感量 0.01 g。 粉碎机。 DB34/T 1373 —2025 2 匀质器。 离心机： ≥4 000 g。 漩涡混合机。 冰箱。 氮吹仪。 微量加样器及配套吸头：（单道 20 μL，50 μL，100 μL，多道50 μL～300 μL）。 7 样品处理 试样制备 7.1.1 畜禽肌肉、肝脏、肾脏去筋膜切成小块，粉碎机制成糜状， 10000 rpm均质2 min。 7.1.2 禽蛋，去壳，将蛋清和蛋黄搅拌均匀。 试样提取 称取 2.0±0.05 g 均质或搅拌均匀后组织样品 于 50 mL 离心管中，分别加入 2 mL 三氯乙酸 溶液 （5.2）、6 mL 乙腈（5.3），涡动 5 min，室温 4000 g 离心 5 min 后，取 2 mL 上层液于 另一 50 mL 离心管中， 依次加入 2 mL 氢氧化钠溶液（ 5.4）和 4.5 mL 正已烷（ 5.5），涡动 5 min，4000 g 离心 5 min， 取上层有机相 3 mL 于离心管中， 50℃～60℃氮气吹干， 加入 0.5 mL 复溶工作液 （ 5.1.9）， 涡动 1 min，取 50 μL 用于检测。 试样贮存 制备好的 试样按检样和备样 置于 4℃下可保存 3天～4天，或于 -18℃以下保存 6 个月。 8 测定步骤 测定在室温（ 20℃～25℃）条件下操作，测定之前将试剂盒以及所有试剂恢复至室温（约 1 h～2 h）。 按标准工作液和供试样品数量取孔条插入酶标板（ 5.1.1），标准工作液和供试样品做两孔平行， 记录下好对应的位置。 分别在各孔中加入 50 μL 标准工作液（ 5.1.2）或7.3项下待测试样溶液，每孔加入 50 μL 抗体 工作液（ 5.1.3），用盖板膜封板，轻轻振荡酶标板 10 s，充分混匀，室温下避光反应 60 min。 揭开盖板膜，倾出板孔中的液体，在所有微孔中加 260 μL 洗涤工作液（ 5.6），轻轻振荡酶标板 15 s～30 s，充分混匀，倾出微孔中的洗涤液，在吸水纸上拍干，彻底清除微孔中的残留液和气泡，重 复洗板4遍。 每孔加 100 μL底物A、B 混合液（ 5.7）用盖板膜封板，轻轻振荡酶标板 10 s，充分混匀，室温 下避光反应 15 min～20 min。 揭开盖板膜，每孔加 50 μL终止液（ 5.1.8），轻轻振荡酶标板 10 s，充分混匀， 5 min内在 450 nm下测定吸光度值。 9 结果判定和表述 用获得的标准工作液和供试样品溶液吸光度值的比值进行计算，见式（ 1）： DB34/T 1373 —2025 3 相对吸光度值 (%)= %100 0BB ································ ········· (1) 式中： B — 标准工作液或供试样品溶液的平均吸光度值； B0 — 0浓度的标准工作液的平均吸光度值。 将计算的相对吸光度值（ ％）对应氯丙嗪标准溶液浓度（ µg/L）的自然对数作半对数坐标系统曲 线图，对应的试样浓度（ A）可从校正曲线算出，畜禽肌肉、肝脏、肾脏及禽蛋中氯丙嗪残留量结果计 算见式（ 2）： X=𝐴×𝑉×𝑓×1000 𝑚×1000 ································ ·················· (2) 式中： X — 供试样中氯丙嗪的含量，单位为微克 /千克（µg/kg）； A — 供试样的相对吸光度值（ ％）对应的氯丙嗪的含量，单位为微克 /升（ µg/L）； V — 加入复溶工作液体积 ，单位为毫升 (mL)； f — 稀释倍数 ； m — 试样的取样量，单位为克（ g）。 注： 计算结果表示到小数点后三位。 检测结果小于检出限时判为未检出，大于或等于检出限时，应使用色谱质谱联用法进行确认。 10 检测方法灵敏度、准确度、精密度 灵敏度 本方法在畜禽肌肉、肝脏、肾脏及禽蛋的检出限为 0.5 μg/kg。 准确度 本方法在 2～5 倍检出限添加浓度水平上的回收率为 80％～120％。 精密度 本方法的批内变异系数 CV％≤30％，批间变异系数 CV％≤30％。 DB34/T 1373 —2025 4 附录 A （资料性） 氯丙嗪酶联免疫吸附法试剂盒组成 A.1 酶标板：包被 有氯丙嗪抗体。 A.2 氯丙嗪标准 工作液：浓度分别为： 0.0 μg/L、0.1 μg/L、0.2 μg/L、0.5 μg/L、1.0 μg/L。 A.3 抗体工作液。 A.4 酶标记物工作液。 A.5 浓缩洗涤液。 A.6 底物A液。 A.7 底物B液。 A.8 终止液。 A.9 复溶工作液。 A.10 洗涤工作液： 使用前， 取浓缩洗涤液（ A.5） ，用水按 1：19（V/V）稀释，混匀。 A.11 底物A、B 混合液：分别取底物 A液（A.6） 、底物 B液（A.7） ，按1：1（V/V）充分混匀，在 5 min 内使用。