ICS 01.040.65 CCS B 04 团 体 标 准 T / N A I A 0 2 6 —2 0 2 1T/NAIA 0120-2022 酿酒葡萄及葡萄酒中单宁酸含量的测定 高效液相色谱法 Determination of tannic acid in wine grape and wine by High-performance liquid chromatography 2022-04-27发布 2022-05-01实施 宁夏化学分析测试协会 发 布 发布TB 全国团体标准信息平台 前 言 本文件按照 GB/T 1.1-2020 《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规 则》的规定起草。 本文件由宁夏化学分析测试协会提出并归口。 本文件起草单位 ：宁夏农产品质量标准与检测技术研究所、宁夏食品检测研究院、宁夏 化学分析测试协会。 本文件主要起草人 ：刘霞、杨春霞、赵子丹、王晓菁、牛艳、杨静、吴燕、葛谦、苟春 林、开建荣、李彩虹、张伟、张学玲、王芳、张艳、张小飞。 本文件为首次发布。 全国团体标准信息平台 酿酒葡萄及葡萄酒中单宁酸含量的测定 高效液相色谱法 1 范围 本文件规定了酿酒葡萄及葡萄酒中单宁酸含量的高效液相色谱测定方法。 本文件适用于酿酒葡萄及葡萄酒中的单宁酸含量的高效液相色谱方法测定。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款 。其中，注日期 的引用文件， 仅该日期对应的版本适用本文件 ；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所 有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法。 3 术语和定义 本文件无术语和定义。 4 原理 试样用甲醇溶液震荡提取 ，高速离心后 ，高效液相色谱法测定 ，以保留时间定性 ，面积 外标法定量。 5 试剂与材料 除非另有规定外，所有试剂均为分析纯，水符合 GB/T 6682中规定的一级水。 5.1 试剂 5.1.1 乙腈（ CH 3CN）：色谱纯。 5.1.2 甲醇（ CH 3OH）：色谱纯。 5.1.3 氯化钠（ NaCl）：分析纯。 5.1.4 磷酸溶液（ H3PO 4）：优级纯。 5.2 溶液配制 5.2.1　甲醇溶液（ 8+2）：取80 mL甲醇加入 20mL水中，搅拌均匀、备用。 全国团体标准信息平台 5.3 标准品 单宁酸标准品（ C76H52O46，CAS 1401-55-4 ）：纯度 ≥ 98%。 5.4 标准溶液配制 单宁酸标准储备液（ 1.00 g/L）：准确称取单宁酸标准品（ 精确至 0.00001g ），用甲醇 溶解并定容至 10.0 mL容量瓶中，摇匀， 配制成 1.00 g/L的标准储备溶液。 6 仪器与设备 6.1 高效液相色谱仪：配紫外检测器。 6.2 分析天平： 感量 0.01 g和0.00001 g。 6.3 组织捣碎机。 6.4 振荡器： 震荡频率不低于 240 r/min。 6.5 离心机： 转速不低于 4 000 r/min。 6.6 涡旋混合器。 6.7 破壁机： 转速不低于 10 000 r/min。 6.8 离心管： 50 mL，塑料。 6.9 滤膜： 0.22 μm，有机相。 7 试样的制备 去除酿酒葡萄中果柄等杂质，用破壁机打浆，置于样品瓶中，待测。 8 试样的提取 8.1 酿酒葡萄 称取浆状试验 3.00 g（精确至 0.01 g）于50 mL离心管， 加入 25 mL甲醇溶液 （5.2.1），在200 r/min振荡频率下震荡提取 20 min后，于4 000 r/min离心 3 min，准确吸 取上清液 1.00 mL经滤膜（ 6.9）过滤，收集滤液待测。 8.2 葡萄酒 准确移取葡萄酒样品 3.00 g（精确至 0.01 mL）于50 mL离心管， 其它提取步骤同 8.1。 9 仪器参考条件 9.1 色谱柱： Ultimate AQ-C18型（ 4.6 mm×250 mm，5.0 μm），或同等性能的色谱柱。 9.2 柱温： 30 ℃。 全国团体标准信息平台 9.3 检测波长： 280 nm。 9.4 流速： 0.8 mL/min。 9.5 进样量： 10.0 μL。 9.6 流动相： 见表 1。 表1 流动相梯度洗脱程序 时间 / min 流速 mL/min A相（ 0.1%磷酸水溶液） % B相（乙腈） % 0 0.8 5 95 15 0.8 8 92 20 0.8 10 90 20.1 0.8 5 95 25 0.8 5 95 10 标准曲线的绘制 用甲醇将单宁酸标准储备液（ 4.7）按不同倍数稀释，配制系列单宁酸标准工作液，浓 度依次为 0.5、2、10、20、40、60、80、100 mg/L，以质量浓度 x（mg/L）为横坐标 ，以相 应的响应峰面积 y为纵坐标绘制标准曲线（ 单宁酸标准色谱图见图 A.1）。 11 测定 将待测液上机测定 ，根据标准曲线得到待测液中单宁酸的浓度 ，以保留时间定性 ，色谱 峰面积定量，试样溶液中单宁酸响应值均应在标准曲线范围内。 12 结果计算和表达 样品中单宁酸的含量按公式（ 1）计算： ………………………………… （1） 式中： X —试样中单宁酸含量，单位为 mg/kg； C—单宁酸标准溶液的质量浓度，单位为 mg/L； A0—单宁酸标准溶液的峰面积； A —样液的峰面积； V —提取体积，单位为 mL； m —试样质量，单位为 g； 注：测定结果取两次测定的算术平均值，计算结果保留两位有效数字。 13 精密度 m0AVACX 全国团体标准信息平台 在重复性条件下获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过算术平均值的 10%。 14 定量限 本方法的定量限 为0.5 mg/kg。 全国团体标准信息平台 单宁酸 - 11.616AU 0.0000.0020.0040.0060.0080.0100.0120.0140.0160.0180.0200.0220.024 分钟2.00 4.00 6.00 8.00 10.00 12.00 14.00 16.00 18.00 20.00 22.00 24.00 附 录 A （资料性附录） 单宁酸标准溶液色谱图 图A.1 单宁酸标准溶液（浓度为 20mg/L）色谱图 全国团体标准信息平台