ICS65.020.01 CCSB64 21 辽宁省地方标准 DB21/T3924—2024 欧美杨组培育苗技术规程 Technicalregulationsfortissue-culturedseedingsofPopulus×euramericana 2024-01-30发布 2024-03-01实施 辽宁省市场监督管理局  发布DB21/T3924—2024 I目录 前言..................................................................................II 1范围.................................................................................1 2规范性引用文件.......................................................................1 3术语和定义...........................................................................1 4环境及器具灭菌.......................................................................1 5培养基制备...........................................................................2 6外植体选择及处理.....................................................................2 7初代培养.............................................................................2 8继代培养.............................................................................2 9生根培养.............................................................................3 10炼苗................................................................................3 11室内移栽与管理......................................................................3 12大田移栽与管理......................................................................3 13病虫害防治..........................................................................4 14档案管理............................................................................4 附录A（资料性）MS培养基配方...........................................................5 附录B（资料性）欧美杨组培育苗病虫害种类及防治措施......................................6DB21/T3924—2024 II前言 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起 草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机关不承担识别专利的责任。 本文件由辽宁省林业和草原局提出并归口。 本文件起草单位：辽宁省杨树研究所。 本文件主要起草人：矫丽曼、杨成超、冯连荣、纪纯阳、彭儒胜、李晓宇、李晓鹏、梁立巍、张妍、 李文颖。 本文件发布实施后，任何单位和个人如有问题和意见建议，均可以通过来电和来函等方式进行反馈， 我们将及时答复并认真处理，根据实际情况依法进行评估及复审。 归口管理部门通讯地址：辽宁省林业和草原局（沈阳市和平区太原北街2号），联系电话： 024-23448927。 文件起草单位通讯地址：辽宁省杨树研究所（辽宁省盖州市北海新区），联系电话：0411-7555835。DB21/T3924—2024 1欧美杨组培育苗技术规程 1范围 本文件规定了欧美杨组培育苗的环境及器具灭菌、培养基制备、外植体选择及处理、初代培养、继 代培养、生根培养、炼苗、室内移栽与管理、大田移栽与管理和病虫害防治等技术要求。 本文件主要适用于欧美杨组培育苗。 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T8321.10农药合理使用准则（十） LY/T1882林木组织培养育苗技术规程 LY/T2280林木种苗生产经营档案 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 欧美杨Populus×euramericana（Dode）Guinier 指欧洲黑杨与美洲黑杨的杂交品种及品种间优良杂种，又称欧美杨无性系。 3.2 外植体explant 用于植物组织培养的离体植物器官、组织、细胞以及原生质体。 4环境及器具灭菌 4.1培养室灭菌 用消毒液（75%酒精等）对地面、组培架等室内设施进行消毒。 4.2超净工作台灭菌 打开工作台通风系统，用75%酒精棉擦拭台面，再用75%酒精喷洒内部空间，关闭玻璃罩，紫外灯 照射25min～35min，关闭紫外灯30min后进入工作。 4.3接种室灭菌 接种室内喷洒75%酒精，紫外灯照射25min～35min，关闭紫外灯30min后进入工作。DB21/T3924—2024 24.4器具灭菌 将剪刀、镊子等接种器具清洗干净，用报纸包好，放于耐高温湿热灭菌袋中，121℃高压灭菌30min。 使用前在超净工作台内用酒精灯外焰灼烧30s，或用接种器具灭菌器直接灭菌。 5培养基制备 5.1基本培养基 MS培养基，配方见附录A。 5.2培养基配制、灭菌及保存 按LY/T1882有关规定执行。 6外植体选择及处理 6.1外植体选择 欧美杨萌动前，选择无病虫害、生长健壮1年生嫩枝，切枝水培，待芽展叶后，剪取萌发伸展长度 在1cm以上的幼叶和叶柄，用流水冲洗1min左右。 6.2外植体处理 在无菌条件下，外植体用75%的酒精浸泡30s，然后用0.1%升汞溶液浸泡5min，再用无菌蒸馏 水冲洗3次，取出后沥干水分备用。 7初代培养 7.1初代培养基 初代培养基配方为：MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.05mg/L～0.1mg/L+蔗糖20.0g/L+琼脂6.0g/L， pH6.5。 7.2接种 在超净工作台内，叶片用无菌剪刀剪掉叶子边缘并在叶片中间与叶脉平行处剪开1～3个裂口，用 无菌镊子夹取平铺于初代培养基中，每瓶接种3～4个；叶柄用无菌剪刀剪掉两端，接种方法同叶片。 7.3培养条件 在温度25℃±1℃、光照强度2000Lux、光照12h/d～16h/d的培养室内进行培养。 8继代培养 8.1继代培养基DB21/T3924—2024 3继代培养基配方为：MS+6-BA0.3mg/L～0.5mg/L+NAA0.1mg/L～0.2mg/L+蔗糖25.0g/L+琼脂 6.0g/L，pH6.5。 8.2接种 初代培养愈伤组织大于1cm2或不定芽大于5个时进行继代培养。将愈伤组织（含不定芽）剪成2～3 块转接于继代培养基中。 8.3培养条件 培养条件同7.3。 9生根培养 9.1生根培养基 生根培养基配方为：1/2MS+IBA0.3mg/L～0.4mg/L+蔗糖20.0g/L+琼脂6.0g/L，pH6.0。 9.2接种 继代培养不定芽长度≥2.0cm时进行生根培养。选取健壮不定芽，用无菌剪刀剪去下端的叶片，并 在培养基上方剪下主茎，用无菌镊子夹出插入生根培养基中，插入深度1cm，每瓶接种3个。 9.3培养条件 培养条件同7.3。 10炼苗 选取苗高≥4cm、根长1cm～2cm、不定根5个以上的生根培养瓶，将瓶盖打开，室内放置2d～3d。 11室内移栽与管理 11.1室内移栽 选择根系发达、苗高≥4cm的组培苗，用镊子轻轻从炼苗培养基中拔出，用清水洗去附着在根部 的培养基，剪去较长的根系，室内移栽到塑料营养杯中，营养杯规格上口径8cm、底径6cm、杯深12 cm。使根系在营养杯中均匀分布，并与基质紧密接触，基质装到营养杯口下1cm处。基质为腐殖土、 大田土、河沙按2﹕1﹕1比例混合均匀，经121℃高压灭菌30min。 11.2管理 移栽完立即浇透水，并搭建塑料拱棚保持拱棚内温度25℃～30℃、空气湿度80%～95%、土壤湿 度50%～60%。5d～7d后去掉拱棚，适时浇水。待苗高≥10cm时，转移至室外培养，定期浇水。 12大田移栽与管理DB21/T3924—2024 4当苗高≥15cm时，选择阴天或傍晚进行移栽，移栽前7d大田灌足底水，去掉营养杯，带基质栽植 于大田，株行距20cm×50cm，栽完立即浇水。 移栽后根据土壤墒情适时浇水