ICS65.020.30 CCSB40 1507 呼伦贝尔市地方标准 DB1507/T105—2024 敖鲁古雅驯鹿人工授精技术操作规程 OperatingrulesofartificialbreedingtechnologyofAoluguyareindeer 2024-06-27发布 2024-07-27实施 呼伦贝尔市市场监督管理局  发布DB1507/T105—2024 I前言 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件由呼伦贝尔市农牧局提出并归口。 本文件起草单位：呼伦贝尔市农牧科学研究所、呼伦贝尔市产品质量计量检测所、黑龙江八一农垦 大学、内蒙古农业大学、新右旗农牧业事业发展中心、额尔古纳市三河回族乡综合保障和技术推广中心、 呼伦贝尔市农牧局、呼伦贝尔市农牧业综合行政执法支队、呼伦贝尔市动物疫病预防控制中心、呼伦贝 尔市农畜产品质量安全中心。 本文件主要起草人：韩萨茹拉、王景顺、罗保华、韩欢胜、斯木吉德、多乐、崔雪、郑帅、吉亚、 德擎音、白宏琦、张潇丹、于喆、姜楠、呼伦、张小英、秀春、王嫚、杨萨日娜、乌云斯琴、格根塔那、 苏兰、王巍、罗洋、云彦平、于维新。DB1507/T105—2024 1敖鲁古雅驯鹿人工授精技术操作规程 1范围 本文件规定了敖鲁古雅驯鹿人工授精的电刺激采精、精液处理、同期发情、人工输精和记录。 本文件适用于敖鲁古雅驯鹿人工繁育。 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T2828.11计数抽样检验程序第11部分：小总体声称质量水平的评定程序 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 同期发情synchronousestrus 利用某些激素制剂人为地控制并调整母驯鹿在预定时间内集中发情。 3.2 阴道栓vaginalsuppository 一种内含孕酮的特制放置器放入其母驯鹿阴道内的同期发情装置。 3.3 人工授精artificialinsemination 用人工方法适时将公驯鹿精液输入发情母驯鹿子宫体内达到受孕，以替代自然交配的一种繁殖方法。 4电刺激采精 4.1公驯鹿保定 将采精公驯鹿用麻醉药物麻醉，使鹿体呈侧卧姿势。 4.2公驯鹿处置 排除宿粪，剪掉包皮口周围的长毛，用清水和生理盐水先后冲洗包皮腔，灭菌纱布擦干包皮内部及 龟头，将阴茎导出，用纱布固定，对准集精杯。 4.3采精 探棒用水沾湿缓慢插入直肠，深度23cm～25cm，探棒电极一侧紧贴直肠腹面，电压调至零位，打 开电源开关，电压由低向高逐档升高（电压1V～6V，频率50Hz),每档通、断交替刺激5～10次，每次DB1507/T105—2024 2通电5s，间断2s～3s，电压升至射精档位时，在该档继续交替刺激直至射精完毕，也可再升一档进行 刺激，使其充分射精，精液用集精杯接取。 5精液处理 5.1鲜精品质检查 5.1.1采精量 采用电刺激法一次采精1ml～2ml。 5.1.2色泽、气味 正常精液为乳白色或乳黄色，微腥。浅黑色、绿色、带血或被尿液污染的精液不能使用。 5.1.3鲜精活力 鲜精在38℃温度下，镜检精子活力应≥0.7。 5.2精液冷冻 5.2.1稀释液配方 Tirs2.7g、柠檬酸1.53g、葡萄糖1.0g、甘油6.0ml定容至100ml蒸馏水中。 5.2.2稀释液配制方法 称取Tirs、柠檬酸、葡萄糖放入三角烧杯中充分溶解，蒸气灭菌30min，冷却后取出待用。使用前 加入20%的卵黄、青霉素10万IU，链霉素10万IU，充分搅拌均匀置入3℃～5℃的冰箱中待用，放置时 间不应超过24h。 5.2.3稀释倍数 依据鲜精的活力和密度确定稀释倍数，使解冻后每个细管冻精含有效精子数1000万～1500万。 5.2.4冷冻细管准备 规格为0.25ml细管。细管上应印有冷冻精液生产单位代号、品种代号、冻精生产日期、公驯鹿号。 5.2.5冷冻细管分装 精液稀释10min后分装、封口。 5.2.6平衡 将分装好的细管精液用2层毛巾或4层纱布包好，放入4℃冰箱中平衡3h～4h。 5.2.7细管精液冷冻 将平衡后的细管精液均匀铺于冷冻架上，使冷冻架与液氮面保持2cm～2.5cm的高度，冷冻温度控 制在-120℃～-140℃，5min～8min后将冷冻架浸入液氮中。 5.3细管冻精检测与保存DB1507/T105—2024 35.3.1检测 每批细管冻精应抽样检测，按照GB/T2828.11的规定执行。从液氮罐中迅速取出细管冻精，时间不 超过5s，投入38℃温水中解冻10s，取出后用吸纸或纱布擦去水珠。解冻3min～5min精子完全复苏时 镜检，镜检温度38℃，活力≥0.3视为合格。 5.3.2保存 细管冻精贮存的液氮罐应定期检查液氮面的高度，保证细管冻精始终浸在液氮中。 6同期发情 6.1母驯鹿的选择及管理 选择30月龄以上、母性强、性情温顺、生殖系统及乳腺发育良好、发情表现明显的母驯鹿。自制围 栏对母驯鹿进行集中饲养管理。 6.2药品和用具 6.2.1药品 鹿用孕酮阴道栓、孕马血清促性腺激素、生理盐水。 6.2.2用具 置栓器。清洗擦干后用75%的酒精或高压灭菌的方式消毒。 6.3埋栓 清洗消毒母驯鹿外阴部，将孕酮阴道栓装入置栓器，经母驯鹿阴门沿生殖道背部插入阴道前端，推 动置栓器手柄将孕酮阴道栓置入阴道内，孕酮阴道栓的拉线留在母驯鹿的阴门外，缓慢抽出置栓器，完 成置栓处理。 6.4注射孕马血清促性腺激素 置栓9d～11d拉动露在阴门外的孕酮阴道栓拉线缓慢取出，同时按照产品说明肌注孕马血清促性腺 激素。孕马血清促性腺激素使用记录见附录A。 7人工输精 7.1发情鉴定 采用试情法鉴定。将试情公驯鹿放入母驯鹿群中，接受公驯鹿爬跨视为发情。发情后12h～16h输 精。 7.2输精准备 将输精母驯鹿保定，清洗消毒阴门。 7.3输精器械准备 输精枪和开膣器在使用前用75%的酒精消毒，生理盐水擦拭。DB1507/T105—2024 47.4细管冻精的解冻 细管冻精在输精前5min～7min内解冻，立即输精，不应超过15min。解冻方法见5.3.1。 7.5细管冻精活力检查 细管冻精解冻，38℃镜检，精子活力≥0.3方可输精。 7.6输精方法 开膣器输精。将细管冻精装入输精枪，将输精枪自阴门向斜上方插入5cm～10cm，避开尿道口， 再改为平插或斜下插，双手配合调节输精枪方向，使输精枪缓慢到达子宫颈口进入子宫体内，缓慢注入 精液并拉出输精枪。