ICS 65.120 B 46 DB13 河 北 省 地 方 标 准 DB13/T 1384.10—2011 饲料中 20 种磺胺类药物的测定 Determination of 20 kinds of sulfonamides antibiotics residues in feed producing animal origin 2011 - 05 - 10 发布 河北省质量技术监督局 2011 - 05 - 20 实施 发 布 DB13/T 1384.10—2011 前 言 本标准按照GB/T 1.1－2009给出的规则起草。 本标准由河北省质量技术监督局提出。 本标准起草单位：河北省食品质量监督检验研究院、河北医科大学、北京市出入境检验检疫局技术 中心、石家庄市疾病预防控制中心、河北省饲料产品质量监督检验站。 本标准主要起草人：张岩、吕品、卢晓宇、李挥、丛斌、张敬轩、张宏、米振杰、贾茜、沈磊、杨 立学、李志平、高振同、武英利。 I DB13/T 1384.10—2011 饲料中 20 种磺胺类药物的测定 1 范围 本标准规定了饲料中20种磺胺类药物残留量的液相色谱-串联质谱的测定方法。 本标准适用于饲料中磺胺甲基嘧啶、磺胺吡啶、磺胺甲氧哒嗪、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺氯哒嗪、磺 胺甲基异噁唑、磺胺二甲异噁唑、磺胺甲噻唑、磺胺嘧啶、磺胺噻唑、磺胺－6－甲氧嘧啶、磺胺邻二 甲氧嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺苯吡唑、磺胺间二甲氧嘧啶、磺胺胍、磺胺甲噻二唑、磺胺、磺胺喹噁 啉、磺胺氯哒酮残留量的检验。 本标准各组分的定量限均为10.0 μg/kg。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 原理 样品中的磺胺类药物经乙腈和二氯甲烷依次提取，液液分配净化后，液相色谱-串联质谱法测定， 外标法定量。 4 试剂和材料 除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为 GB/T 6682 规定的一级水。 4.1 甲醇：色谱纯。 4.2 乙腈：色谱纯。 4.3 二氯甲烷：分析纯。 4.4 正己烷：分析纯。 4.5 无水硫酸钠：分析纯。于 650℃灼烧 4 h，冷却后，贮存于具玻璃塞的干燥玻璃容器内备用。 4.6 乙酸：优级纯。 4.7 0.2％乙酸水溶液：移取 0.2 mL 乙酸，加水定容至 1 L。 4.8 样品定容液：移取 700 mL0.2％乙酸水溶液，用甲醇定容至 1 L。 4.9 磺胺甲基嘧啶、磺胺吡啶、磺胺甲氧哒嗪、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺氯哒嗪、磺胺甲基异噁唑、磺 胺二甲异噁唑、磺胺甲噻唑、磺胺嘧啶、磺胺噻唑、磺胺－6－甲氧嘧啶、磺胺邻二甲氧嘧啶、磺胺二 甲嘧啶、磺胺苯吡唑、磺胺间二甲氧嘧啶、磺胺胍、磺胺甲噻二唑、磺胺、磺胺喹噁啉、磺胺氯哒酮标 准物质，纯度≥99.0％。 4.10 标准储备溶液（100 mg/L）：准确称取适量的每种磺胺标准物质，用甲醇配成 100 mg/L 的标准 贮备溶液。-18℃保存，保存期为三个月。 1 DB13/T 1384.10—2011 5 仪器和设备 5.1 5.2 5.3 5.4 5.5 5.6 5.7 6 6.1 液相色谱串联四极杆质谱仪，配有电喷雾（ESI）离子源。 分析天平：感量 0.000 1 g 和 0.01 g。 均质器。 涡旋混合器 振荡器。 高速离心机，5 000 r/min。 氮气吹干仪。 测定步骤 提取 称取5 g均质试样（精确到0.01 g）和10 g经灼烧无水硫酸钠，于具盖的聚丙烯离心管中，加入25 mL 乙腈，用均质器于18 000 r/min 下均质1 min，5 000 r/min 离心5 min，吸取上清液转至50 mL 容量瓶 中。用25 mL 二氯甲烷重复提取一次，振荡20 min，5 000 r/min 离心5 min，合并上清液并用二氯甲烷 定容到50 mL。取10 mL 提取液室温下氮气吹干。用2 mL样品定容液（4.9）涡旋溶解残渣。 6.2 净化 上述残渣溶解液用3 mL正己烷脱脂，5 000 r/min 离心5 min，去除上层正己烷层后，重复脱脂一 次。取下层溶液过0.2 μm 有机系滤膜，供液相色谱－串联质谱测定。 6.3 测定 6.3.1 色谱参考条件 色谱柱：C8 柱，150 mm×4.6 mm（i.d.），5 μm，或相当者。 柱温：室温。 进样量：20 μL。 流动相：A相－甲醇，B相－0.2％乙酸水溶液。梯度洗脱条件见表1。 流速：0.2 mL/min。 表1 时间（min） 6.3.2 液相色谱梯度洗脱条件 甲 醇 0.2％乙酸水溶液 0～5 10％ 90％ 6～15 30％ 70％ 16～20 80％ 20％ 21～30 30％ 70％ 31～35 10％ 90％ 质谱条件 离子源：电喷雾离子源（ESI）。 2 DB13/T 1384.10—2011 扫描方式：正离子扫描。 检测方式：多反应监测（MRM）。 Q1，Q3均为单位分辨率（UNIT）。 定性离子对、定量离子对、裂解电压、碰撞能量见附录A。 6.3.3 标准曲线的绘制 取空白样品按照6.1和6.2处理。用所得的样品溶液将磺胺标准储备溶液逐级稀释得到的浓度为 0.005 mg/L、0.01 mg/L、0.02 mg/L、0.05 mg/L、0.2 mg/L的标准工作液，浓度由低到高进样检测， 以定量离子峰面积为纵坐标，以浓度为横坐标作图，得到标准曲线回归方程。 6.3.4 定量测定 外标法定量。待测样液中各种磺胺的响应值应在标准曲线线性范围内，超过线性范围则应稀释后再 进样分析。 6.3.5 定性判定 在相同试验条件下，样品中待测物与同时检测的标准溶液的保留时间偏差在±2.5％之内；且样品 谱图中各组分定性离子的相对丰度与标准溶液谱图中定性离子的相对丰度进行比较，若偏差不超过表2 规定的范围，则可判定为样品中存在对应的待测物。 表2 6.4 定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度（％） ＞50 ＞20～50 ＞10～20 ≤10 允许的相对偏差（％） ±20 ±25 ±30 ±50 空白试验 除不加试样外，均按上述测定步骤进行。 7 结果计算 按式（1）计算。计算结果需扣除空白值，结果保留3位有效数字。 X = c × A× v × K As × m …………………………………(1) 式中： X ──试样中待测组分残留量，单位为毫克每千克（mg/kg）。 c ──标准工作溶液中磺胺类药物浓度，单位为毫克每升（mg/L）。 A ──试样溶液中磺胺类药物的峰面积。 As ──标准工作溶液中磺胺类药物的峰面积。 v ──试样定容体积，单位为毫升（mL）。 m ──试样称样量，单位为克（g）。 K ──稀释倍数。 3 DB13/T 1384.10—2011 8 准确度 在添加浓度10.0 μg/kg～40.0 μg/kg浓度范围内，回收率在70%～120%之间。 9 允许差 在重复条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的15％。 4 DB13/T 1384.10—2011 AA 附 录 A （资料性附录） 磺胺类药物的参考质谱条件 表A.1 名称 磺胺甲氧哒嗪 磺胺对甲氧嘧啶 磺胺氯哒嗪 磺胺喹噁啉 磺胺吡啶 磺胺甲嘧啶 磺胺甲噻二唑 磺胺二甲氧嘧啶 磺胺-6-甲氧嘧啶 磺胺醋酰 磺胺二甲嘧啶 磺胺噻唑 磺胺胍 磺胺邻二甲氧嘧啶 磺胺硝苯 磺胺二甲异嘧啶 定性离子对 m/z 281.0/156.3 281.0/215.4 281.0/156.3 281.0/215.4 285.1/156.3 285.1/108.3 301.3/156.3 301.3/92.0 250.2/156.3 250.2/184.4 265.3/156.3 265.3/172.2 271.3/156.2 271.3/108.3 311.2/156.3 311.2/108.3 281.0/156.3 281.0/215.4 215.4/156.2 215.4/108.3 279.0/186.3 279.0/156.3 256.0/156.3 256.0/108.3 215.2/156.3 215.2/108.3 311.1/156.3 311.1/108.3 336.0/156.2 336.0/294.3 279.2/124.1 279.2/186.3 磺胺类药物的参考质谱条件 定量离子对 m/z 281.0/156.3 281.0/156.3 285.1/156.3 301.3/156.3 250.2/156.3 265.3/156.3 271.3/156.2 311.2/156.3 281.0/156.3 215.4/156.2 279.0/186.3 256.0/156.3 215.2/156.3 311.1/156.3 336.0/156.2 279.2/124.1 裂解电压 V 碰撞能量 V 120 10 120 15 120 10 120 10 100 15 100 20 120 10 120 15 120 10 120 10 120 10 120 10 120 10 120 20 120 15 120 20 120 10 120 10 120 5 120 15 120 15 120 15 120 15 120 15 100 15 100 20 120 15 120 15 120 15 120 20 120 15 120 15 5 DB13/T 1384.10—2011 表 A.1 名称 磺胺苯吡唑 磺胺甲基异噁唑 磺胺嘧啶 磺胺二甲异噁唑 定性离子对 m/z 315.2/156.3 315.2/160.4 254.1/156.3 254.1/147.2 251.1/156.3 251.1/185.4 268.3/156.3 268.3/113.2 (续) 定量离子对 m/z 315.2/156.3 254.1/156.3 251.1/156.3 268.3/156.3 裂解电压 V 碰撞能量 V 120 20 120 20 120 15 120 20 120 10 120 10 120 5 120 10 6