ICS 13.060.30 Z 10 DB32 江 苏 省 地 方 标 准 DB32/T 3764-2020 医疗污水病毒检测样品制备通用技术规范 General technical specification for the sample preparation of viral test in medical wastewater 2020-03-11 发布 2020-03-12 实施 发 布 DB32/T 3764-2020 目 次 前言 ................................................................................. Ⅱ 1 范围 ................................................................................ 1 2 规范性引用文件 ...................................................................... 1 3 术语、定义和缩略语 .................................................................. 1 4 试剂和材料 .......................................................................... 2 5 仪器与设备 .......................................................................... 3 6 样品采集、保存、运输和交接 .......................................................... 3 6.1 样品采集 ..................................................................... 3 6.2 样品保存、运输和交接 ......................................................... 4 7 样品制备 ............................................................................ 4 7.1 7.2 7.3 7.4 7.5 7.6 总则 ......................................................................... 4 技术要求 ..................................................................... 4 pH 调节 ...................................................................... 5 预过滤与悬浮颗粒物病毒检测样品制备 ........................................... 5 游离态病毒检测样品制备 ....................................................... 5 数据记录 ..................................................................... 5 8 质量控制 ............................................................................ 5 9 废物处置 ............................................................................ 5 10 风险防范 ........................................................................... 6 10.1 现场采集 .................................................................... 6 10.2 样品运输 .................................................................... 6 10.3 实验室分析 .................................................................. 6 附录 A （资料性附录） 医疗污水病毒检测样品采集和制备记录表 ............................ 7 附录 B （规范性附录） 医疗污水病毒检测样品制备过程中质量控制方法 ...................... 8 参考文献 ............................................................................. 10 I DB32/T 3764-2020 前 言 为指导全省医疗机构开展医疗污水中病毒的监测，规范医疗污水病毒检测样品制备流程，确保监测 数据准确，根据《医疗机构水污染物排放标准》《污水监测技术规范》等有关规定，特制定本标准。 本标准由南京大学提出。 本标准由江苏省生态环境厅归口。 本标准起草单位：南京大学宜兴环保研究院、南京大学、清华苏州环境创新研究院。 本标准主要起草人：任洪强、张徐祥、耿金菊、刘鹏、黄霞、刘欣宇、许柯、朱燕、周小红、刘艳 臣、吴兵、黄辉。 II DB32/T 3764-2020 医疗污水病毒检测样品制备通用技术规范 1 范围 本标准规定了医疗污水病毒检测样品制备的试剂和材料、仪器和设备、样品采集、保存、运输和交 接、样品制备、质量控制、废物处置和风险防范要求。 本标准适用于医疗污水病毒检测样品制备。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB 18466-2005 医疗机构水污染物排放标准 HJ 91.1-2019 污水监测技术规范 HJ 421-2008 医疗废物专用包装袋、容器和警示标志标准 医疗废物集中处置技术规范（试行） 环发〔2003〕206号 3 术语、定义和缩略语 3.1 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1.1 医疗污水 medical wastewater 从事疾病诊断、治疗活动的医院、卫生院、疗养院、门诊部、诊所、卫生急救站等产生的废水，主 要指医疗机构门诊、病房、手术室、各类检验室、病理解剖室、放射室、洗衣房、太平间等处排出的诊 疗废水、生活及粪便污水。当医疗机构其他污水与上述污水混合排出时，视为医疗污水。 3.1.2 病毒 virus 由核酸和蛋白质外壳构成的严格细胞内寄生的非细胞生物。 3.1.3 样品制备 sample preparation 根据检测方法的要求，将样品处理到符合后续分析要求的所有样品制备过程，包括但不限于 pH 调 节、预过滤和样品富集等步骤。 1 DB32/T 3764-2020 3.1.4 病毒富集 viral enrichment 通过吸附-洗脱、离心-重悬浮、过滤等技术方法，缩小样品体积同时提高样品中病毒浓度的过程。 3.1.5 空白样品 blank sample 将实验用水代替实际样品，按照与实际样品一致的分析步骤进行测定。 3.1.6 空白加标样品 blank spike sample 将实验用水代替实际样品，并添加已知量标准物质，按照与实际样品一致的分析步骤进行测定。 3.1.7 基体加标样品 matrix spike sample 在待测样品中添加已知量标准物质的样品，按照与实际样品一致的分析步骤进行测定。 3.1.8 噬菌体效价 bacteriophage titer 每毫升试样中含有侵染性噬菌体的粒子数，一般以噬菌斑形成单位（Plaque forming unit, PFU）计 数。 3.2 缩略语 下列缩略语适用于本文件。 EDTA：乙二胺四乙酸（Ethylenediaminetetraacetic Acid） Tris：三羟甲基氨基甲烷（2-Amino-2-hydroxymethyl-1, 3-propanediol） 4 试剂和材料 4.1 所用试剂应使用分析纯试剂和无菌纯水，特殊情况除外。 4.2 浓盐酸溶液：ω（HCl）=37 %。 4.3 浓硫酸溶液：c（H2SO4）=18.4 mol/L。 4.4 乙醇溶液：ω（C2H5OH）=75 %。 4.5 消毒剂：有效氯浓度为 1000 mg/L。 4.6 次氯酸钠溶液Ⅰ：有效氯质量分数为 5 %。 4.7 次氯酸钠溶液Ⅱ：有效氯质量分数为 0.1 %。取 20 mL 次氯酸钠溶液Ⅰ（4.6），与 980 mL 无菌 纯水混合。 2 DB32/T 3764-2020 4.8 硫代硫酸钠溶液：ω（Na2S2O3）=5 %。称取预先在 105 ℃~110 ℃干燥 2 h 的硫代硫酸钠 50 g，溶 于 950 mL 纯水中，在 20 ℃ ±2 ℃下平衡，混匀。放入聚乙烯瓶或硬质玻璃瓶中，密封保存。 4.9 盐酸溶液：c（HCl）= 1 mol/L。量取 83 mL 浓盐酸溶液（4.2），缓慢加入 917 mL 水中，混匀。 4.10 氯化镁溶液：c（MgCl2）=2.5 mol/L。称取预先在 105 ℃~110 ℃干燥 2 h 的无水氯化镁 23.80 g， 溶解于 80 mL 水中，加水稀释至 100 mL，混匀。 4.11 稀硫酸溶液Ⅰ：c（H2SO4）=100 mmol/L。使用玻璃棒沿杯壁向纯水中缓慢加入 5.4 mL 浓硫酸溶 液（4.3），充分混匀。待冷却至室温后，加水稀释至 1000 mL，放入聚乙烯瓶或硬质玻璃瓶中，密封 保存。 4.12 稀硫酸溶液Ⅱ：c（H2SO4）=0.5 mmol/L。向纯水中加入 5 mL 的稀硫酸溶液Ⅰ（4.11），充分混 匀。待冷却至室温后，加水稀释至 1000 mL，放入聚乙烯瓶或硬质玻璃瓶中，密封保存。 4.13 氢氧化钠溶液Ⅰ：c（NaOH）=1 mol/L。称取 4 g 氢氧化钠溶解于纯水中，混匀，待冷却至室温 后，加水稀释至 100 mL，放入聚乙烯