ICS 13.060 C 51 DB37 山 东 省 地 方 标 准 DB37/T 4146—2020 水质 联苯胺的测定 固相萃取-液相色谱-串联质谱法 Water quality—Determination of benzidine—Solid phase extraction-Liquid chromatography-Tandem mass spectrometry 2020 - 09 - 25 发布 山东省市场监督管理局 2020 - 10 - 25 实施 发 布 DB37/T 4146—2020 目 次 前言 ................................................................................ II 1 范围 .............................................................................. 1 2 规范性引用文件 .................................................................... 1 3 方法原理 .......................................................................... 1 4 试剂和材料 ........................................................................ 1 5 仪器和设备 ........................................................................ 2 6 样品 .............................................................................. 2 7 分析步骤 .......................................................................... 2 8 结果计算与表示 .................................................................... 4 9 精密度和准确度 .................................................................... 4 10 质量保证和质量控制 ............................................................... 5 1 DB37/T 4146—2020 前 言 本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。 本标准由山东省住房和城乡建设厅提出并组织实施。 本标准由山东省城镇给水排水标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：山东省城市供排水水质监测中心、国家城市供水水质监测网武汉监测站、国家城 市供水水质监测网杭州监测站、国家城市供水水质监测网青岛监测站、山东省分析测试中心、中国兵器 工业集团第五三研究所。 本标准主要起草人：宋艳、贾瑞宝、孙韶华、赵清华、刘莉、许燕、李世蔚、张立亚、王晓芳、赵 汝松、王晓利、高岩立、冀克俭、潘慧慧、黄允河。 2 DB37/T 4146—2020 水质 联苯胺的测定 固相萃取-液相色谱-串联质谱法 警告：实验中使用的溶剂和试剂均具有一定的毒性，对健康具有潜在的危害，应尽量避免与这些化 学品的直接接触。样品制备过程应在通风橱中进行，操作时应按规定要求佩戴防护器具,避免接触皮肤 和衣物。 1 范围 本标准规定了测定生活饮用水及其水源水中联苯胺的固相萃取-液相色谱-串联质谱法。 本标准适用于生活饮用水及其水源水中联苯胺的测定。 取水样500 mL，浓缩倍数为125倍时，本标准测定联苯胺的方法检出限为0.010 μg/L，测定下限为 0.040 μg/L。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 5750.2-2006 生活饮用水标准检验方法 水样的采集与保存 GB/T 5750.3-2006 生活饮用水标准检验方法 水质分析质量控制 GB/T 32465 化学分析方法验证确认和内部质量控制要求 GB/T 33087 仪器分析用高纯水规格及试验方法 HJ/T 91 地表水和污水监测技术规范 HJ/T 164 地下水环境监测技术规范 3 方法原理 本方法采用固相萃取柱对水中的联苯胺进行富集，经甲醇洗脱后，进入液相色谱分离后串联质谱检 测，根据保留时间、碎片离子质荷比定性，外标法定量测定。 4 试剂和材料 4.1 4.2 4.3 4.4 4.5 4.6 4.7 固相萃取柱：HLB（6 mL，200 mg）或等效固相萃取柱。 高纯水：水质满足 GB/T 33087 的规定。 甲醇：色谱纯。 氮气：纯度≥99.999 %。 乙酸铵：分析纯。 硫代硫酸钠：分析纯。 联苯胺标准溶液：ρ=100 mg/L，溶剂为甲醇，有证标准物质。 3 DB37/T 4146—2020 4.8 标准使用液：ρ=1.0 mg/L。取 1 000 μL 联苯胺标准溶液（4.7），用甲醇（4.3）稀释并定容至 100 mL，配制 1.0 mg/L 标准使用液。于 4 ℃以下冷藏密封避光保存。 4.9 乙酸铵-水溶液：c =10.0 mmol/L。称取 0.770 8 g 乙酸铵（4.5）用高纯水（4.2）溶解并定容至 1 L。 4.10 硫代硫酸钠溶液：用硫代硫酸钠（4.6）、高纯水（4.2）配制，浓度为 5 g/L。 5 仪器和设备 5.1 5.2 5.3 5.4 5.5 5.6 5.7 液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源。 色谱柱：C18 柱或其他等效色谱柱。 固相萃取装置。 棕色样品瓶：2 mL。 容量瓶：100 mL。 采样瓶：1 L～4 L 棕色玻璃瓶，螺旋盖（具聚四氟乙烯涂层的密封垫）。 微量注射器：100 μL 和 1 000 μL。 6 样品 6.1 样品采集与保存 按照HJ/T 91和HJ/T 164的相关规定采集样品。用采样瓶（5.6）采集样品。 按照GB/T 5750.2—2006的相关规定贮存样品。样品采集后在4 ℃下冷藏避光保存，24 h内完成前处 理，5 d内完成样品分析。若水样中存在残留氯，加入硫代硫酸钠溶液（4.10）去除余氯。 6.2 试样制备 6.2.1 活化 依次用10 mL甲醇（4.3）和10 mL高纯水（4.2）活化固相萃取柱（4.1）。 6.2.2 样品富集 量取500 mL水样，以10 mL/min流速通过活化后的固相萃取柱，完成固相萃取富集。 注：富集所用水样体积根据水样实际情况可适当增减；不同型号的自动固相萃取仪或手动固相萃取仪，按照各自型 号仪器或手动进样操作规程进行萃取。 6.2.3 淋洗 用5 mL高纯水（4.2）以10 mL/min流速淋洗萃取柱，淋洗完成后用氮气吹干。 6.2.4 洗脱 用4 mL甲醇（4.3）以1 mL/min流速洗脱吸附在固相萃取柱上的被测组分，收集洗脱液至浓缩管中， 并用甲醇（4.3）定容至4 mL，取1 mL上机测定。 6.3 空白试样制备 用高纯水（4.2）代替样品，按照与样品（6.2）相同的步骤制备空白试样。 4 DB37/T 4146—2020 7 分析步骤 7.1 液相色谱条件 7.1.1 7.1.2 7.1.3 7.1.4 7.2 流动相：A 相——甲醇（4.3）、B 相——10 mmol/L 乙酸铵-水溶液（4.9）。 洗脱模式及洗脱流速：采用等度洗脱，流动相为 A:B= 98:2（V:V），洗脱速率为 0.3 mL/min。 柱温：30 ℃。 进样体积：10 μL。 质谱条件 7.2.1 离子源：电喷雾离子源，正离子模式。 7.2.2 离子源温度：350 ℃。 7.2.3 扫描方式：MRM，多反应监测条件见表 1。 表1 质谱参考参数设置 物质名称 母离子 子离子 碎裂电压 碰撞电压 V V * 167 联苯胺 185 29 130 ** 151 30 注：带*为定量离子，带**为定性离子。 7.3 校准曲线的绘制 7.3.1 本方法使用外标法定量。 7.3.2 校准系列的配制：分别取 5 μL、25 μL、50 μL、100 μL、150 μL、200 μL、250 μL 标准使 用液（4.8），用甲醇（4.3）定容至 1 mL，配制成浓度分别为 5 μg/L、25 μg/L、50 μg/L、100 μg/L、 150 μg/L、200 μg/L、250 μg/L 校准系列溶液，保存在 2 mL 棕色样品瓶（5.4）中待上机测试。 7.3.3 将校准系列溶液按浓度由低到高的顺序依次进样，以校准系列浓度为横坐标，峰面积为纵坐标， 绘制校准曲线。 7.4 试样测定 7.4.1 采用自动进样器进样，进样量为 10 μL。 7.4.2 将 6.2 处理后的试样上机测定。 注：若样品中联苯胺浓度超出校准曲线最高点，用甲醇（4.3）稀释后测定。 7.4.3 联苯胺 MRM 色谱图见图 1 所示。 5 DB37/T 4146—2020 图1 联苯胺 MRM 色谱图 7.5 空白试验 按照与试样测定（7.4）相同的步骤进行空白试样（6.3）的测定。 8 结果计算与表示 8.1 定性结果 根据联苯胺MRM色谱图中的保留时间和特征离子对进行定性分析。 8.2 定量结果 根据定量离子的峰面积外标法定量。由校准曲线得到样品中待测物的浓度ρx按照公式（1）计算， 测定结果位数的保留与测定下限一致，最多保留三位有效数字。 ρx = ....................................... (1) 式中： ρx ——样品中组分质量浓度，单位为微克每升（μg/L）； ρ0 ——固相萃取洗脱液质量浓度，单位为微克每升（μg/L）； Vt ——固相萃取洗脱液浓缩后定容体积，单位为毫升（mL）； Vs ——水样体积，单位为毫升（mL）。 9 精密度和准确度 9.1 精密度 4家实验室分别测定浓度为0.08 μg/L～1.00 μg/L的高纯水加标样品。实验室内相对标准偏差为 0.9 %～14 %；实验室间的相对标准偏差为8.0 %～12 %