ICS 67 X 04 DB13 河 北 省 地 方 标 准 DB 13/T 5189.7—2020 天然植物提取物中危害成分检测 第 7 部分：天然番茄红中苯并[α]芘的测定 2020 - 06 - 28 发布 河北省市场监督管理局 2020 - 07 - 28 实施 发 布 DB13/T 5189.7—2020 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 DB13/T 5189《天然植物提取物中危害成分的测定》共分12个部分： ——第 1 部分：亚硝酸盐的测定； ——第 2 部分：二氧化硫的测定； ——第 3 部分：正己烷、丙酮、乙酸乙酯、甲醇和乙醇 5 种有机溶剂残留的测定； ——第 4 部分：辣椒提取物中砷、铅、镉、铬、汞的测定； ——第 5 部分：万寿菊提取物中对氧基苯胺的测定； ——第 6 部分：万寿菊提取物中乙氧基喹啉的测定； ——第 7 部分：天然番茄红中苯并[α ]芘的测定； ——第 8 部分：辣椒提取物中苏丹红的测定； ——第 9 部分：辣椒提取物中叔丁基对苯二酚的测定； ——第 10 部分：辣椒红中赭曲霉毒素 A 的测定； ——第 11 部分：叶黄素中苯的测定； ——第 12 部分：甜菊糖苷中邻苯二甲酸酯的测定。 本部分为DB13/T 5189的第7部分。 本标准由河北省市场监督管理局提出并归口。 本标准起草单位：晨光生物科技集团股份有限公司、河北省食品检验研究院、石家庄海关技术中 心、清河食品药品检验所。 本标准主要起草人：连运河、杨清山、史国华、吉桂珍、程远欣、艾连峰、张凤霞。 I DB13/T 5189.7—2020 天然植物提取物中危害成分检测 第 7 部分：天然番茄红中苯并[α]芘的测定 1 范围 本部分规定了天然番茄红中苯并[α]芘的高效液相色谱-荧光检测器测定方法。 本部分适用于天然番茄红中苯并[α]芘的测定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法。 3 原理 试样经溶剂提取、凝胶渗透色谱净化后，用反相高效液相色谱分离，荧光检测器检测，根据色谱 峰的保留时间定性，外标法定量。 4 试剂或材料 警告：苯并[α]芘是一种已知的强致癌物质，测定时应特别注意安全防护。 除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。 4.1 试剂 4.1.1 环己烷（C6H12）。 4.1.2 乙酸乙酯（C4H8O2）。 4.1.3 乙腈（C2H3N）：色谱纯。 4.2 试剂配制 环己烷—乙酸乙酯：1+1（体积比）：量取500 mL环己烷与500 mL乙酸乙酯混合均匀。 4.3 标准品 苯并[α]芘：（C20H12，CAS: 50-32-8）：纯度≥99 %，或具有标准物质证书。 4.4 标准溶液配制 1 DB13/T 5189.7—2020 4.4.1 苯并[α ]芘标准储备溶液（1.0 mg/L）：称取苯并[α ]芘标准物质适量（精确值 0.01 mg）， 用乙腈稀释至浓度为 1.0 mg/L，4 ℃避光保存，有效期 1 年。 4.4.2 苯并[α ]芘标准工作溶液（10.0 μ g/L）：取苯并[α ]芘准储备溶液（1.0 mg/L）1.00 mL， 用乙腈定容至 100 mL，4 ℃避光保存，有效期 1 个月。 4.4.3 标准使用溶液配制：准确量取标准储备液（1.0 mg/L）0.1 mL、0.5 mL、1 mL、2 mL、5 mL 至 100 mL 容量瓶中，用乙腈定容至刻度，充分摇匀，得到浓度为 1 μ g/L、5 μ g/L、10 μ g/L、20 μ g/L、 50 μ g/mL 的系列标准使用液，现配现用。 5 仪器和设备 5.1 高效液相色谱仪：配有荧光检测器。 5.2 凝胶渗透色谱净化系统（GPC）。 5.3 分析天平：感量为 0.1 mg 和 0.01 mg。 5.4 涡旋混匀器。 5.5 超声波清洗器。 5.6 离心机。 5.7 旋转蒸发仪。 6 试验步骤 6.1 提取 称取样品0.1 g（精确至0.1 mg）于50 mL离心管中，加入环己烷—乙酸乙酯混合溶液25 mL，混匀， 超声提取10 min后，离心5 min，转速5 000 r/min。上清液过0.45 μm有机滤膜后作待净化液。 6.2 净化 取待净化液于GPC样品管中，进行GPC净化，进样量5 mL，收集洗脱液，于40 ℃下旋转蒸发至干。 残渣用2 mL乙腈超声溶解，过0.45 μm有机滤膜，供液相色谱检测。 凝胶渗透色谱净化参考条件： a) 凝胶渗透色谱净化系统； b) 凝胶柱规格 400 mm*25 mm（内径）； c) 色谱柱填料 Bio-Beads S-X3（38～75 μm），30 g； d) 流动相：环己烷—乙酸乙酯：1+1（体积比）； e) 流速：5 mL / min； f) 收集时间：17～27 min（具体时间以实际标样为准）。 6.3 测定 6.3.1 色谱参考条件 色谱参考条件如下： 2 DB13/T 5189.7—2020 a) b) c) d) e) f) 色谱柱：C18，250 mm×4.6 mm，5 μm，或性能相当者； 流动相：乙腈—水：88+ 12（体积比），等度洗脱； 柱温：40 ºC； 激发波长：384 nm，发射波长：406 nm； 流速：1.0 mL / min； 进样量：10 μL。 6.3.2 测定 分别检测标准使用溶液和制备的样品液，以保留时间定性，外标法定量，色谱图见附录A。 6.3.3 空白试验 除不加试样外，均按上述测定条件和步骤进行。 7 试验结果 试样中苯并[α]芘含量按式（1）计算。 X A  cs  V ………………………………………………（1） As  m 式中： X —试样中苯并[α]芘的含量，单位为微克每千克（g/kg）； A —样液中苯并[α]芘的色谱峰面积； cs —标准工作溶液中苯并[α]芘的浓度，单位为微克每升（μg/L）； V —样品的最终稀释提交，单位为毫升（mL）； As —标准工作溶液中苯并[α]芘的色谱峰面积； m —试样质量，单位为克（g）。 计算结果需扣除空白值，计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示， 保留三位有效数字。 8 精密度 在重复性条件下获得的两次独立测试结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。 9 检出限和定量限 检出限为10.0 μg/kg，定量限为35.0 μg/kg。 3 DB13/T 5189.7—2020 AA 附 录 A （资料性附录） 高效液相色谱图 苯并[α]芘标准溶液色谱图，如图A.1所示。 数据文件名:std-甜味2.lcd 样品ID:std 250 mV 检测器A Ex:384nm,Em:406nm 苯并[α]芘 200 150 100 50 0 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 17.5 20.0 22.5 min 20.0 22.5 min 图A.1 苯并[α]芘标准溶液色谱图 样品中的苯并[α]芘检测色谱图，如图A.2所示。 数据文件名:YL3-0133-180628C.lcd 样品ID:std011 mV 175 检测器A Ex:384nm,Em:406nm 150 125 100 75 50 苯并[α]芘 25 0 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 17.5 图A.2 样品中的苯并[α]芘色谱图 _________________________________ 4