ICS 65.020.30 B 43 DB15 内 蒙 古 自 治 区 地 方 标 准 DB15/T 1969—2020 绵羊人工授精及同期发情技术操作规程 Technical specification for artificial insemination and estrus synchronization in sheep 2020-08-28 发布 内蒙古自治区市场监督管理局 2020-09-28 实施 发 布 DB15/T 1969—2020 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 本标准由乌兰察布市农牧局和乌兰察布市场监督管理局提出。 本标准由内蒙古自治区畜牧业标准化技术委员会（SAM/TC19）归口。 本标准起草单位：乌兰察布市畜牧工作站、内蒙古赛诺种羊科技有限公司。 本标准主要起草人：周宁聪、张勇、马云慧、乌德乐呼、孙晓红、罗康石、闫鑫鹏、李红光、张立 果、刘剑锋、李靖、萨仁格勒、包梅荣。 I DB15/T 1969—2020 绵羊人工授精及同期发情技术操作规程 1 范围 本标准规定了绵羊人工授精和同期发情各环节操作中应遵循的技术要求。 本标准适用于开展绵羊人工授精和同期发情配种。 2 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 2.1 人工授精 artificial insenmination 利用器械用人工方法采集公羊的精液，经检查、稀释、保存等特定方法处理后，用器械输入到 发情母羊生殖道的特定部位，使其妊娠的一种家畜繁殖技术。 2.2 种公羊 breeding ram 具有种用价值，外貌评价为特级或一级，体质健康，无遗传病，不允许有已发布的动物防疫法 中所明确的二类疫病中的任何一种病。 2.3 同期发情 estrus synchronization 利用激素制剂，人为的控制并调整母羊发情周期的进程，使其在预定时间内集中发情。 2.4 精子活力 sperm motility 直线运动的精子数占总精子数的百分率。一般采用十级评分制，如果 90%的精子呈直线运动的， 评为 0.9 级，80%的精子呈直线运动的，则为 0.8 级，以此类推。 2.5 精子密度 semen density 每毫升精液中所含的精子数。每毫升精液中精子数在25亿以上者为密，20亿～25亿为中，低于 20亿的为稀。 1 DB15/T 1969—2020 3 配种前准备 3.1 土杂劣质公羊清群去势。 3.2 试情公羊的选留和补饲。 3.3 待配母羊组群试情和饲养管理。 3.4 对配种站室内外环境用 0.1%新洁尔灭或 0.2%高锰酸钾溶液喷洒消毒，并记录。 3.5 配制所需各种试剂，建立配种记录和技术档案。 4 人工授精 4.1 器械、用具的洗涤和消毒 4.1.1 用具、器械用 2%～3%碳酸钠溶液（或中性洗涤剂）清洗后，用温水冲洗备用。金属和玻璃 器械等接触精液的器具用高压灭菌消毒、蒸汽消毒或火焰消毒，使用前用生理盐水冲洗。 4.1.2 假阴道清洗后，再用温水冲洗 2-3 次,使用前 6h 用 75%酒精棉球擦洗，放消毒柜内备用，不 能有酒精残留。 4.1.3 凡士林用前带瓶隔水煮沸消毒 20min 或用高压灭菌消毒。 4.2 采精前的准备 4.2.1 环境 采精室保持空气清洁、环境安静。 4.2.2 台羊 将发情母羊保定在采精架上，将后躯清理干净。 4.2.3 种公羊准备 配种前15d进行调教和训练采精。采精时将公羊牵入采精室，清洁生殖部位，接近母羊，以刺激 其性欲。 4.2.4 假阴道 安装假阴道，从假阴道注水口注入温水，使内胎温度保持在 38℃～40℃。 4.2.5 温度要求 采精室、消毒室温度要求18℃～25℃。 4.3 采精 4.3.1 采精者蹲在台羊后方一侧，用手横卧假阴道，使其前低后高，与母羊骨盆的水平线呈 35°～ 40°，紧靠台羊臀部。当公羊爬跨、伸出阴茎时，迅速用另一只手拖住阴茎包皮，将阴茎导入假阴 道内。当公羊猛力前冲，并弓腰后，即完成射精。顺势将假阴道取下，并立即竖立，使集精瓶一端 向下，取下集精瓶，送操作室检查。 2 DB15/T 1969—2020 4.3.2 在配种期间，成年种公羊每天可采精 1 次～2 次，连采 3d～5d，休息 1d。必要时，一天可 采精 3 次～4 次，育成公羊酌情减少采精次数。 4.4 精液品质检查 4.4.1 外观检查 4.4.1.1 色泽和气味 呈乳白或浅黄色，肉眼可见云雾状运动，无味或略带腥味。凡带有腐败臭味，出现红色、褐色、 绿色的原精，不可使用。 4.4.1.2 射精量 一次射精量绵羊0.5ml以上。 4.4.1.3 显微镜检查 镜检温度36℃。用灭菌玻璃棒蘸取少许原精，涂在载玻片上加盖玻片后，在显微镜下观察精子 活力、密度。镜检活力在0.7以上，密度中等以上，畸形精子率不超过20%的精液为优良。镜检时原 精活力低于0.5级的不可进行人工授精配种。 4.5 精液的稀释与保存 4.5.1 稀释液 4.5.1.1 常用种类 生理盐水、维生素B12注射液、葡萄糖-柠檬酸钠液、脱脂乳液、葡萄糖-卵黄液等。 4.5.2 精液的稀释 4.5.2.1 稀释原则 稀释液、精液在同温下进行稀释。高倍稀释时采用分步稀释，将稀释液缓慢多次注入精液中， 不可将精液直接一次倒入稀释液中。原精采下后尽快进行稀释处理，稀释动作轻缓，稀释过程应避 开阳光直射。 4.5.2.2 稀释倍数 根据原精质量、密度、输精剂量和每个剂量中所含的有效精子数确定稀释倍数，每个剂量有效 精子数不低于2000万。 4.5.3 稀释后精液的保存 4.5.3.1 常温保存（15℃～20℃） 用一次性注射器或灭菌的输精器抽取稀释好的精液，分装于灭菌容器中，用纱布包好在室温下 放于避光处保存，4h内用完。 4.5.3.2 低温保存（2℃～5℃） 稀释后的精液要逐步降温，1h～2h降温到5℃左右，包好放于保温箱中保存，24h内用完。降温 后的精液可作长距离运输，升温处理后输精。 3 DB15/T 1969—2020 4.6 发情鉴定 绵羊的发情周期14d～19d，发情持续24h～30h。发情母羊通常表现为频频走动、鸣叫、不安心 采食，外阴粘膜常常充血潮红、肿胀。 母羊发情鉴定以母羊接受公羊爬跨并站立不动为发情标准。 发情母羊抓出隔离，标记，以备配种。 4.7 输精 4.7.1 母羊保定 分为杠式、坑式（输精架）和人为保定。 4.7.2 用具准备 头灯、清洗液、母羊外阴擦拭用具、输精枪和开膣器。 4.7.3 输精 保定母羊，清洁外阴部，将开膣器缓慢插入阴道，找到子宫颈口，将精液缓慢注入子宫颈口内， 输精后取出输精器，轻拍母羊后躯部,完成输精。输精剂量为每只羊0.05ml～0.2ml。 4.7.4 适时输精 母羊发情接受爬跨站稳，首次输精，12h后再次输精。 5 同期发情 5.1 常用药品 阴道孕酮海绵栓、注射用血促性素（孕马血清促性腺激素PMSG）。 5.2 同期母羊的选择 实施同情发情配种的母羊，应选择年龄在1周岁～5周岁之间，繁殖机能正常，健康无疫病。 5.3 同期发情方法 5.3.1 阴道孕酮海棉栓+孕马血清促性腺激素法。 5.3.1.1 放栓 母羊在任意一天，用特制的放置器或开膣器将海绵栓放入母羊阴道。海绵栓尼龙绳露出阴部 5cm～10cm。 5.3.1.2 取栓和冲洗 以放栓当日为零天计算，第9d～12d，取出海棉栓，同时用生理盐水加青霉素或2‰的高锰酸钾 溶液（淡粉色）冲洗母羊阴道。 5.3.1.3 注射血促性素 在取栓同时肌肉注射孕马血清促性腺激素（PMSG）330IU。 4 DB15/T 1969—2020 6 输精 6.1 常规输精 从撤栓后零小时计算，分别在 36h、48h、60h 各输精一次，每次输精剂量为 0.1ml～0.2ml。 6.2 腹腔镜输精 采用套管穿刺方法，借助腹腔镜,将精液直接输到母羊子宫角内的技术。 6.2.1 母羊的准备 母羊输精前禁食、禁水 24h～36h。 6.2.2 器械消毒 手术器械使用前用 0.5%的新洁尔灭浸泡 30min，或在 75%酒精中浸泡消毒。 6.2.3 母羊的保定 将发情母羊保定在输精架上，将输精架后部升起，使母羊处于臀高头低姿势，呈仰卧状，角度 为 40°～70°。 6.2.4 术部消毒 剪净乳房前部腹毛，剪毛范围 20cm×20cm,用肥皂水清洗手术部位，剃净毛茬，用 0.1%的新洁 尔灭水清洗，擦干后用 2%～4%的碘酒对手术部位消毒，用 75%的酒精脱碘、晾干。 6.2.5 套管针打孔位置 在母羊腹中线两侧 3cm～5cm,两侧乳头前下方 8cm～10cm 处,分别向两侧髋关节方向插入套管 针，拔出套管针内芯，其中一侧插入腹腔镜。 6.2.6 发情羊子宫状态 通过腹腔内窥镜，观察子宫角及卵巢发育状态，子宫角颜色潮红，质地硬，卵巢上有滤泡发育。 6.2.7 输精 在腹腔镜视野内，将输精枪对准子宫角中段，大弯处，针头快速刺入子宫腔，输入 1/2 精液， 拔出输精枪针头，同样方法完成另一侧子宫角输精操作。 6.2.8 创口处理 两侧套管针撤出后，创口用 2%～5%碘酊消毒。 6.2.9 母羊护理 输精后的母羊，停留休息 2h～3h，切忌立即驱赶。输精 2h 第一次采食要控制饲喂量，为正常 量的 1/3，不喂精料，只喂优质青干草，术后 3d 逐步喂给精料。 _________________________________ 5