ICS 65.020.20 B 16 DB12 天 津 市 地 方 标 准 DB12/T 988—2020 果蔬中胺鲜酯和噻苯隆农药残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 Determination of diethyl aminoethyl hexanoat and thidiazuron residues in fruits and vegetables by Liquid chromatography-tandem mass spectrometry 2020 - 10 - 14 发布 天津市市场监督管理委员会 2020 - 11 - 15 实施 发 布 DB12/T 988—2020 前 言 本标准依据GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 本标准由天津市农业农村委员会提出并归口。 本标准起草单位：天津市农业质量标准与检测技术研究所、摩天众创（天津）检测服务有限公司。 本标准主要起草人：李辉，邵辉，刘磊，李娜，林宏芳，李晋津，张宇轩，牛艺融，梁静，张玉婷， 宋淑荣，郭永泽、冯兆欣、郝玉杰、潘喆。 I DB12/T 988—2020 果蔬中胺鲜酯和噻苯隆农药残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 1 范围 本标准规定了液相色谱-串联质谱法测定水果、蔬菜中胺鲜酯和噻苯隆的方法原理、试剂和材料、 仪器和设备、操作步骤及结果表示。 本标准适用于水果、蔬菜中胺鲜酯和噻苯隆残留量的测定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB 2763 食品中农药最大残留限量 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 方法原理 样品经乙腈和水提取，经液液分配，用UPLC/MS/MS多反应监测条件方法测定，基质匹配外标法定量。 4 试剂和材料 4.1 基本要求 除另有说明外，所用试剂均为分析纯。所用水为GB/T 6682规定的一级水。 4.2 试剂 4.2.1 4.2.2 4.2.3 4.2.4 4.2.5 乙腈：色谱纯。 甲醇：色谱纯。 氯化钠。 乙酸：色谱纯。 甲酸：色谱纯。 4.3 农药标准品 胺鲜酯和噻苯隆，纯度均≥97.0％。 4.4 标准储备液 准确称量农药标准品0.01 g(准确至±0.00001 g)，用甲醇定容至50 ml。配制成200 mg/L的标准溶 液。 4.5 基质混合标准工作溶液 1 DB12/T 988—2020 用空白样品基质溶液配制成不同浓度的基质混合标准工作溶液，用于做标准工作曲线。基质混合标 准工作溶液应现用现配。 5 仪器和设备 5.1 5.2 5.3 5.4 5.5 5.6 液相色谱-质谱联用仪：配有电喷雾离子源(ESI)。 电子天平，感量：0.00001 g、0.01 g。 具塞塑料离心管：聚丙烯，50 mL，或相当。 高通量组织研磨仪。 涡旋仪。 离心机。 6 试样制备与保存 试样的制备应按照GB 2763的要求执行。 7 测定步骤 7.1 提取 称经粉碎试样10.00 g于50 mL具塞离心管中，加入20 mL乙腈， 5 mL水，浸泡10 min，用组织研磨 仪振荡提取15 min，向离心管中加入5 g氯化钠，再次振荡提取10 min，于离心机上以4000 r/min离心5 min，取上清液，过0.22 µm滤膜待测。 7.2 测定条件 7.2.1 液相色谱－质谱联用仪：配有电喷雾离子源(ESI+)。 7.2.2 超高效液相色谱条件(Waters H class)： ——色谱柱：Acquity HSS T3(2.1 mm×100 mm，1.7 µm)； ——柱温：25℃； ——进样量：5 µL； ——流动相：乙腈+0.1%甲酸水=75+25(V/V)； ——流速：0.2 mL/min。 7.2.3 质谱条件 (Waters H class /xevo TQ-S)： ——离子源：ESI(+)；毛细管电压：1.5 kV；离子源温度：150℃； ——脱溶剂气温度：400℃；锥孔反吹气流量：150 L/h； ——锥孔反吹压力：7 bar；脱溶剂气流量：800 L/h； ——检测方式为多反应监测扫描模式（MRM） ——每种农药分别选择一对定量离子、一对定性离子。农药的保留时间、定量离子对、定性离子对 和碰撞电压，参见附录 A。 7.3 空白试验 除不加待测样品外，按上述相同条件和步骤进行。 7.4 定性测定 2 DB12/T 988—2020 7.4.1 液相色谱-串联质谱法对样品定性确证须满足以下要求： ——待测样品中被测物的保留时间在外标标准样品保留时间的±2.5%之内； ——定性离子的信噪比大于 3（S/N>3）； ——与外标标准品相比，样品的两个特征离子相对丰度在表 1 规定的许可范围内。 7.4.2 空白添加样品中被测物的总离子流色谱图和特征离子的色谱图参见附录 B。 表1 定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度比（%） 允许的最大偏差（%） >50 ±20 >20～50 ±25 >10～20 ±30 ≤10 ±50 7.5 定量测定 7.5.1 本方法推荐采用外标标准曲线法单离子定量测定。通过与添加到空白样品的标准工作液中已知 质量浓度农药的定量离子进行比较，确定试样溶液中相应农药的浓度。定量用的标准工作液应采用空白 试样基质配制，定量限参见附录 A，色谱图参见附录 B。 7.5.2 试样中各农药残留量以质量分数 ω 计，标准曲线法按式(1)计算，外标单点法按式(2)计算（结 果保留 3 位小数）。 =  V 1000 …………………… （1） m 1000 式中： ω——试样中被测物残留量，单位为毫克每千克（mg/kg）； ρ——通过标准曲线计算得到试样溶液中被测物的质量浓度，单位为微克每毫升（µg/mL）； V——试样溶液的定容体积，单位为毫升（mL）； m——试样质量，单位为克（g）。 或外标单点法定量。 = Cs  A  V 1000 …………………… （2） As  m 1000 式中： ω——试样中被测物残留量，单位为毫克每千克（mg/kg）； Cs——基质标准工作溶液中被测物的质量浓度，单位为微克每毫升（µg/mL）； A——试样溶液中被测物的色谱峰面积； As——基质标准工作溶液中被测物的色谱峰面积； V——试样溶液的定容体积，单位为毫升（mL）； m——试样质量，单位为克（g）。 8 精密度 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的20%。 9 方法定量限 3 DB12/T 988—2020 方法的定量限为： ——胺鲜酯 0.005 mg/kg； ——噻苯隆 0.005 mg/kg。 4 DB12/T 988—2020 AA 附 录 A （资料性附录） 胺鲜酯和噻苯隆检测数据 表A.1 胺鲜酯和噻苯隆检测数据 编号 中文名称 1 胺鲜酯 2 噻苯隆 英文名称 2-Diethylaminoethyl hexanoate thidiazuron 保留时间 （min） 定量离子 1.02 216/143 1.31 221.0/101.9 定性离子 216/143 216/100 21.0/101.9 221.0/93.9 定量限 锥孔电压 碰撞电压 (V) （mg/kg） (V) 26 15/15 0.005 22 15/13 0.005 5 DB12/T 988—2020 BB 附 录 B （资料性附录） 标准品色谱图 bcbq0.02 bcbq0.02 201512300016 MRM of 4 Channels ES+ 216 > 143 (ANXZH) 8.75e6 1.02 201512300016 -5 -0.00 201512300016 % 0.50 1.00 -5 -0.00 201512300016 1.50 2.00 MRM of 4 Channels ES+ 216 > 100 (ANXZH) 6.32e6 1.02 1.00 1.50 2.00 MRM of 4 Channels ES+ 1.31 221 > 93.9 (SBL) 1.41e6 0.50 1.00 1.50 2.00 MRM of 4 Channels ES+ TIC 1.31 1.51e7 % 0.50 1.00 1.02 -5 -0.00 201512300016 1.50 2.00 MRM of 4 Channels ES+ TIC 1.31 1.51e7 1.02 % 95 % 95 -5 -0.00 0.50 95 % 95 -5 -0.00 201512300016 MRM of 4 Channels ES+ 221 > 101.9 (SBL) 1.24e7 1.31 95 % 95 0.50 1.00 1.50 -5 -0.00 Time 2.00 a）胺鲜酯 0.50 1.00 1.50 Time 2.00 b）噻苯隆 图B.1 标准品色谱图 _________________________________ 6