ICS 67 X 04 DB13 河 北 省 地 方 标 准 DB 13/T 5189.10—2020 天然植物提取物中危害成分检测 第 10 部分：辣椒红中赭曲霉毒素 A 的测定 2020 - 06 - 28 发布 河北省市场监督管理局 2020 - 07 - 28 实施 发 布 DB13/T 5189.10—2020 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 DB13/T 5189《天然植物提取物中危害成分的测定》共分12个部分： ——第 1 部分：亚硝酸盐的测定； ——第 2 部分：二氧化硫的测定； ——第 3 部分：正己烷、丙酮、乙酸乙酯、甲醇和乙醇 5 种有机溶剂残留的测定； ——第 4 部分：辣椒提取物中砷、铅、镉、铬、汞的测定； ——第 5 部分：万寿菊提取物中对氧基苯胺的测定； ——第 6 部分：万寿菊提取物中乙氧基喹啉的测定； ——第 7 部分：天然番茄红中苯并[α ]芘的测定； ——第 8 部分：辣椒提取物中苏丹红的测定； ——第 9 部分：辣椒提取物中叔丁基对苯二酚的测定； ——第 10 部分：辣椒红中赭曲霉毒素 A 的测定； ——第 11 部分：叶黄素中苯的测定； ——第 12 部分：甜菊糖苷中邻苯二甲酸酯的测定。 本部分为DB13/T 5189的第10部分。 本标准由河北省市场监督管理局提出并归口。 本部分起草单位：晨光生物科技集团股份有限公司、河北省食品检验研究院、石家庄海关技术中 心、清河食品药品检验所。 本部分主要起草人：高伟、张玉芬、张岩、刘登帅、韩艳超、艾连峰、栾乐华。 I DB13/T 5189.10—2020 天然植物提取物中危害成分检测 第 10 部分：辣椒红中赭曲霉毒素 A 的测定 1 范围 本部分规定了辣椒红中赭曲霉毒素A的高效液相色谱-荧光检测器测定方法。 本部分适用于辣椒红中赭曲霉毒素A的测定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法。 3 原理 试样经提取液提取、离心、过滤后，用反相高效液相色谱分离，荧光检测器检测，根据色谱峰的 保留时间定性，采用单点校正，外标法定量。 4 试剂或材料 警告：赭曲霉毒素 A 是一种已知的强致癌物质，测定时应特别注意安全防护。 除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。 4.1 试剂 4.1.1 乙腈（C2H3N）：色谱纯。 4.1.2 甲醇（CH4O）：色谱纯。 4.1.3 冰醋酸（C2H4O2）。 4.1.4 氯化钠（NaCl）。 4.1.5 磷酸氢二钾（K2HPO4）。 4.1.6 磷酸二氢钾（KH2PO4）。 4.1.7 氯化钾（KCl）。 4.1.8 浓盐酸（HCl）。 4.2 试剂配制 1 DB13/T 5189.10—2020 PBS缓冲溶液：称取7.9 g氯化钠，1.8 g磷酸氢二钾，0.24 g 磷酸二氢钾，0.2 g 氯化钾，900 mL 水溶解，然后用浓盐酸调节pH值至7.0，最后用水稀释至1000 mL，保存于4 ℃备用，可使用7天。 4.3 标准物质 赭曲霉毒素A：（C20H18ClNO6，CAS: 303-47-9）：纯度≥99 %，或具有标准物质证书。 4.4 标准溶液配制 4.4.1 赭曲霉毒素 A 标准储备溶液（1 mg/L）：取赭曲霉毒素 A 标准物质适量，用甲醇—乙腈：1+1 （体积比）稀释至浓度 1 mg/L，摇匀，保存于-20 ℃备用，可以保存 3 个月。 4.4.2 赭曲霉毒素 A 标准工作溶液：根据使用需要，准确吸取一定量的赭曲霉毒素 A 储备液，用流动 相乙腈—水—冰乙酸：495+495+10（体积比）稀释，配成 10 μ g/L 的标准工作液，4 ℃保存，可使用 7 天。 5 仪器和设备 5.1 高效液相色谱仪：配有荧光检测器。 5.2 高速均质机。 5.3 分析天平：感量为 0.1 mg 和 0.01 mg。 5.4 涡旋混匀器。 5.5 超声波清洗器。 5.6 离心机。 5.7 精密 pH 酸度计。 6 试验步骤 6.1 样品液制备 称取试样1 g（精确至0.1 mg）于50 mL离心管中，加入甲醇10 mL，超声10 min，涡旋2 min，离 心5 min，转速5 000 r/min。取上清液5 mL置于50 mL容量瓶中，用PBS溶液定容，混匀，用玻璃纤维 滤纸过滤，滤液过0.22 μm有机滤膜，供液相色谱检测。 6.2 测定 6.2.1 色谱参考条件 色谱参考条件如下： a) 色谱柱：C18，250 mm×4.6 mm，5 μm，或性能相当者； b) 流动相：乙腈—水—冰乙酸：495+495+10（体积比）等度洗脱； c) 柱温：40 ℃； d) 激发波长：333 nm；发射波长：477 nm； e) 流速：1.0 mL/min； 2 DB13/T 5189.10—2020 f) 进样量：10 μL。 6.2.2 测定 分别检测标准使用溶液和制备的样品液，以保留时间定性，外标法定量，色谱图见附录A。 6.2.3 空白试验 除不加试样外，均按上述测定条件和步骤进行。 7 试验结果 试样中赭曲霉毒素A含量按式（1）计算。 X A  cs  V ………………………………………………（1） As  M 式中： X —试样中赭曲霉毒素A的含量，单位为微克每千克（g/kg）； A —样液中赭曲霉毒素A的色谱峰面积； cs —标准工作液中赭曲霉毒素A的浓度，单位为微克每升（μg/L）； V —样品的最终稀释体积，单位毫升（mL）； As —标准工作液中赭曲霉毒素A的色谱峰面积； M —试样质量，单位为克（g）。 计算结果需扣除空白值，计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示， 保留三位有效数字。 8 精密度 在重复性条件下获得的两次独立测试结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。 9 检出限和定量限 检出限为10.0 μg/kg，定量限为30.0 μg/kg。 3 DB13/T 5189.10—2020 AA 附 录 A （资料性附录） 高效液相色谱图 A.1 赭曲霉毒素A标准溶液色谱图，见图A.1 所示。 数据文件名:STD-OTA4.lcd mV 12.5 检测器A Ex:333n m,Em:477n m 赭曲霉毒素 A 10.0 7.5 5.0 2.5 0.0 0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 8.0 9.0 10.0 11.0 12.0 13.0 mi n 13.0 mi n 图A.1 赭曲霉毒素A标准溶液色谱图 A.2 样品中的赭曲霉毒素A检测色谱图，如图A.2 所示。 数据文件名:Y1-0110- 1904 09.lcd mV 2.5 检测器A Ex:333n m,Em:477n m 2.0 1.5 1.0 赭曲霉毒素 A 0.5 0.0 0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 8.0 9.0 10.0 图A.2 样品中的赭曲霉毒素A检测色谱图 _________________________________ 4 11.0 12.0