DB23 ICS 65.020.20 B 38 黑 龙 江 省 地 方 标 准 DB23/T 2735-2020 水稻穗颈瘟人工接种鉴定技术规程 2020-12-03 发布 黑龙江省市场监督管理局 2021-01-02 实施 发 布 DB23/T 2735-2020 前  言 本标准依据 GB/T 1.1-2009 的编写规则起草。 本标准由黑龙江省农业农村厅提出。 本标准起草单位：黑龙江省农业科学院生物技术研究所。 本标准主要起草人：张国民、马军韬、邓凌韦、赵文生、宋显东、张丽艳、王春荣、胡亚军、王永 力、张齐凤、高洪儒、张君、王南博、任洋。 I DB23/T 2735-2020 水稻穗颈瘟人工接种鉴定技术规程 1 范围 本标准规定了水稻穗颈瘟人工接种鉴定技术的术语与定义、环境条件、技术流程、评价标准和技术 档案。 本标准适用于水稻资源、品种（系）等材料对穗颈瘟抗性的人工鉴定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB 3095 环境空气质量标准 GB 5084 农田灌溉水质标准 GB 15618 土壤环境质量 农用地土壤污染风险管控标准（试行） GB/T 15970 稻瘟病测报调查规范 NY/T 3257-2018 稻水稻稻瘟病抗性室内离体叶片鉴定技术规程 3 术语与定义 下列术语与定义适用于本文件。 3.1 穗颈瘟和枝梗瘟 穗颈瘟是稻瘟病的一种形式，发生在穗颈、穗轴和枝梗上，初期为暗褐色小斑点，后逐步呈环状或 上下扩展，因品种不同，病部分别呈现黄褐色、褐色或黑褐色。早期发病大多形成全白穗或局部白穗， 晚期发病则谷粒不饱满，千粒重下降。 3.2 谷粒瘟 谷粒瘟是稻瘟病的一种形式，发生在谷壳和护颖上，早期发病，病斑呈椭圆形，较大，中央灰白色， 以后可逐渐扩展至整个谷粒，造成灰白色至暗灰色瘪粒。后期发病，多形成椭圆形或近圆形斑点，褐色 至红褐色，严重时谷粒不饱满，米粒变黑。 3.3 人工接种 在适宜条件下，通过人工操作将接种体置于水稻植株适当的部位并使之发病的过程。 3.4 接种体 能够侵染水稻植株并引起病害的病原体。 3.5 注射接种 1 DB23/T 2735-2020 用医用注射器将一定量的接种体注射进水稻植株体内的接种方法。 3.6 对照品种 在人工接种鉴定时以全感水稻品种为对照。 3.7 抗病性 植物体所具有的能够减轻或克服病原物致病作用的可遗传性状。 3.8 病情指数 一种评价植物病害发生程度的综合性指标，包括植物病害的发病率与严重度。其中，发病率是指感 病样本数占调查总样本数的百分率，表示发病的普遍程度；严重度用分级法表示，即将发病的严重程度 由轻到重划分出若干个级别，分别用各级的代表值或百分率表示。 3.9 水稻品种 水稻品种包括对照品种和待测水稻材料。 3.10 产量损失率 一种评价植物受逆性条件影响后产量损失程度的指标，包括未发病植株产量和发病植株产量。以穗 为单位，产量损失率计算公式为： A  (B  C ) / B  100% ...........................（1） 式中： A ——产量损失率； B ——同一小区内未发病穗产量，kg； C ——同一小区内接种发病穗产量，kg。 4 环境条件 鉴定时的环境条件，环境空气质量应符合 GB 3095 规定；土壤环境质量应符合 GB 15618 规定；农 田灌溉用水质量应符合 GB 5084 规定。 5 技术流程 5.1 鉴定圃的建立与小区设计 选择易发病环境条件的较为中间的整块田块，有独立的进水口和排水口。在鉴定圃内种植对照和待 测材料。依据水稻材料的数量，在鉴定圃内布局若干个小区，小区内种植待测水稻材料，小区设置为 2 行区，行距为 30cm，株距为 12cm，每行 15 蔸，单本插秧。根据试验目的，设置重复。 5.2 田间管理 水稻种植全过程在常规管理的基础上，创造有利于稻瘟病发病的条件。不带药移栽，偏重施用氮肥 （一般情况下比生产用氮肥增加 30%左右），生长过程中可防虫、除草，但不能施用任何杀菌剂。在水 稻生长的中后期，若发生倒伏，需及时地搭建竹架。 2 DB23/T 2735-2020 5.3 接种鉴定 5.3.1 接种体制备 将稻瘟病菌接种在燕麦片番茄汁琼脂培养基上，于 25℃-27℃条件下培养 5d-7d，用无菌水轻轻洗 下菌丝（菌丝团要小）和分生孢子，将其悬浮液均匀涂于另一新的平板培养基上（培养基要适当硬一些）， 每皿约 400µl，超净工作台中吹干。置于 25℃培养箱中培养约 35-40h 至培养基表面长出一层稀疏的气 生菌丝体。向菌落上加少量无菌水，用棉签轻轻擦去表面的气生菌丝，并用水将培养基表面的菌丝和分 生孢子清洗干净，待培养基表面晾干后罩上 2 层纱布，用皮筋绑好，于 25℃光照条件下培养至有大量 分生孢子产生。从培养基上洗下分生孢子，离心（3000 转/min），弃上清，沉淀下的分生孢子用 0.025% 5 吐温 20 水溶液悬浮，血球计数板计数，孢子悬浮液浓度调至 2×10 个孢子/mL，可用混合菌株或单个 菌株，供接种使用。 5.3.2 接种方法 在水稻始穗期（稻穗抽出 1/3 左右）用医用注射器将合格的孢子悬浮液注入水稻穗苞中下部，接种 量为 1mL/穗，依据试验所需，每个处理接种 100 穗以上。接种后，如中午日照强烈，建议应用单层遮 阴网进行遮挡，以创造利于穗颈瘟发病的田间小气候。 5.4 病情调查 5.4.1 调查时间 水稻乳熟期进行调查，调查 2 次，间隔 7d-10d。 5.4.2 调查方法 每个材料接种处理的 100 穗全部调查，记录每穗水稻穗颈瘟的病级，结果记入表 A.1。 5.4.3 穗颈瘟病情分级指标 穗颈瘟病情按以下标准分级： 0 级：整穗无穗颈瘟、枝梗瘟和谷粒瘟； 1 级：仅有谷粒瘟，发病子粒比例＜2%； 2 级：仅有谷粒瘟，2%≤发病子粒比例＜5%； 3 级：有谷粒瘟和枝梗瘟，产量损失率＜10%； 4 级：有谷粒瘟和枝梗瘟，10%≤产量损失率＜20%； 5 级：有谷粒瘟和枝梗瘟，20%≤产量损失率＜30%； 6 级：有谷粒瘟和枝梗瘟，或穗颈瘟，30%≤产量损失率＜50%； 7 级：有谷粒瘟和枝梗瘟，或穗颈瘟，50%≤ 产量损失率＜60%； 8 级：仅有穗颈瘟，60%≤产量损失率＜70%； 9 级：仅有穗颈瘟，产量损失率≥70%。 6 评价标准 6.1 调查数据登记与计算 将水稻穗颈瘟的田间调查数据，鉴定圃中水稻农事操作及相关情况进行电子数据登记。计算每个水 稻材料年度间的最高穗颈瘟病情指数，登记到表 A.2 中。 3 DB23/T 2735-2020 6.2 病情指数计算公式 以穗为单位，当严重度用分级指标表示时，病情指数计算公式为： R  100  ( Pi  Di ) /( P  DM ) ........................（2） 式中： R Pi Di P DM 6.3 ——病情指数； ——各级病穗数，个； ——各级代表值； ——调查总穗数，个； ——最高级代表值。 抗瘟性评价标准 依据水稻材料的病情指数评价其抗穗颈瘟性，评价标准见表 A.3。 7 技术档案 建立水稻穗颈瘟人工接种鉴定技术档案，内容包括环境条件、技术流程、评价标准及试验数据等。 4 DB23/T 2735-2020 附录 A 资料性附录 水稻穗颈瘟田间调查 A.1 水稻穗颈瘟田间调查见表 A.1 、A.2 和 A.3。 表 A.1 水稻穗颈瘟田间调查记录表 调查时间： 穗数 0 1 水稻品种名称： 2 3 4 生育期： 5 6 7 8 9 1 2 3 4 5 6 7 - 表 A.2 水稻品种病情指数数据表 水稻品种编号 水稻品种名称 表 A.3 穗颈瘟病情指数 水稻穗颈瘟抗性评价标准 抗性评价 评价标准 抗病 Resistant（R） 病情指数＜5 中抗 Moderately resistant（MR） 5≤病情指数＜15 中感 Moderately Susceptible（MS） 15≤病情指数＜30 感病 Susceptible（S） 病情指数≥30 _____________________________ 5