(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210845622.9 (22)申请日 2022.07.19 (71)申请人 南开大学 地址 300350 天津市津南区同砚路38号 (72)发明人 李玲　张连文　 (74)专利代理 机构 天津市北洋 有限责任专利代 理事务所 12 201 专利代理师 陆艺 (51)Int.Cl. C12M 1/12(2006.01) C12M 1/24(2006.01) C12M 1/00(2006.01) C12N 15/10(2006.01) (54)发明名称 一种质粒提取器及提取方法 (57)摘要 本发明公开了一种质粒提取器及提取方法， 质粒提取器包括有两端部设置有外螺纹的透明 管、 侧壁内表 面设置有内螺纹的第一盖体和侧壁 内表面设置有内螺纹的第二盖体； 贯穿第一盖体 的顶壁设置有第一连接管； 贯穿第二盖体的底壁 设置有第二连接管； 第一盖体的顶 壁的内表面依 次活动连接有慢速定性滤纸和医用纱布片； 第二 盖体的底壁的内表面依次活动连接有支撑物和 微孔滤膜； 第一盖体与透明管的端部螺纹连接； 第二盖体与透明管的另一端部螺纹连接。 本发明 的质粒提取器， 结合核酸提取真空纯化过滤系 统， 可实现质粒快速提取， 至少15分钟内完成收 菌到提取质粒的整个过程， 操作简单方便， 大大 节省时间， 并减轻劳动强度， 提取质粒质量 好。 权利要求书1页 说明书3页 附图1页 CN 115093937 A 2022.09.23 CN 115093937 A 1.一种质粒提取器， 其特征是包括有两端部设置有外螺纹的透 明管(1)、 侧壁内表面设 置有内螺纹的第一盖体(2)和侧壁内表面设置有内螺纹的第二盖体(3)； 贯穿第一盖体(2) 的顶壁设置有第一连接管(4)； 贯穿第二盖体(3)的底 壁设置有第二连接管(9)； 所述第一盖 体(2)的顶壁的内表面依次活动连接有慢速定性滤纸(5)和医用纱布片(6)； 所述第二盖体 (3)的底壁的内表面依次活动 连接有支撑物(8)和孔径在0.2 ‑0.45 μm微孔滤膜(7)； 所述第 一盖体(2)与所述透明管(1)的端部螺纹连接； 所述第二盖体(3)与所述透明管(1)的另一端 部螺纹连接 。 2.根据权利要求1所述的一种质粒提取器， 其特征是所述支撑物(8)为医用纱布、 无纺 布或滤纸。 3.一种质粒提取 方法， 其特 征是包括如下步骤： 1)过夜摇菌； 2)使用权利要求1的质粒提取器， 所述质粒提取器包括有两端部设置有外螺纹的透明 管(1)、 侧壁内表面设置有内螺纹的第一盖体(2)和侧壁内表面设置有内螺纹的第二盖体 (3)； 贯穿第一盖体(2)的顶壁设置有第一连接管(4)； 贯穿第二盖体(3)的底壁设置有第二 连接管(9)； 所述第一盖体(2)的顶壁的内表面依次活动连接有慢速定性滤纸(5)和医用纱 布片(6)； 所述第二盖体(3)的底 壁的内表 面依次活动连接有支撑物(8)和孔径在0.2 ‑0.45 μ m微孔滤膜(7)； 所述第一盖体(2)与所述透明管(1)的端部螺纹连接； 所述第二盖体(3)与所 述透明管(1)的另一端部 螺纹连接； 3)旋下第一盖体(2)， 将步骤1)获得的菌液加入透明管； 将所述第二连接管(9)插入核 酸提取真空纯化过滤系统吸附柱插孔， 抽滤， 细菌留在所述微孔滤膜(7)上， 继续抽干， 取下 质粒提取器； 4)使用质粒提取试剂盒， 向透明管中加入溶液P1， 用移液器抽打重悬微孔滤膜(7)上的 细菌； 加入 溶液P2,混匀， 使细菌裂解； 加入溶液P3,混匀， 有白色絮状沉淀生成； 将吸附柱插 入核酸提取真空纯化过 滤系统吸附柱插孔， 加入0.5mL平衡液BL， 平衡吸附柱， 抽干； 5)将第一盖体(2)与所述透明管旋紧， 翻转透明管使第一盖体(2)在下方， 旋下第二盖 体(3)， 将第一盖体连接的第一连接管(4)插入吸附柱上， 抽滤； 质粒保留在吸附柱的吸附膜 上； 6)取下质粒提取器， 用溶液PW对吸附柱进行两次漂洗， 去除吸附膜上的杂质； 将吸附柱 放入收集管后再放于离心机中， 12000rpm离心2min； 在吸附柱内加入50μL洗脱液EB， 12000rpm离心 2min， 洗脱质粒。 4.根据权利要求3所述的方法， 其特 征是所述支撑物(8)为医用纱布、 无 纺布或滤纸。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115093937 A 2一种质粒提取器及提取方 法 技术领域 [0001]本发明属于生物技 术领域， 涉及一种串联式质粒 快速器及提取 方法。 背景技术 [0002]质粒提取是生物医学研究中的一项基本操作， 传统的质粒提取的整个过程包括摇 菌， 收菌， 提取质粒等过程。 目前大部 分实验室使用吸附柱型质粒提取试剂盒辅助质粒提取 过程。 操作者的劳动主要体现在收菌和质粒提取过程， 该过程需要多次离心(8 ‑9次)， 过程 重复， 繁琐。 为了减轻操作者的劳动强度， 亟需一种简便、 易行的质粒 快速提取 方法。 发明内容 [0003]本发明的技 术方案概 述如下： [0004]一种质粒提取器， 包括有两端部设置有外螺纹的透明管1、 侧壁内表面设置有内螺 纹的第一盖体2和侧壁内表面设置有内螺纹的第二盖体3； 贯穿第一盖体2的顶壁设置有第 一连接管4； 贯穿第二盖体3的底壁设置有第二连接管9； 所述第一盖体2的顶壁的内表面依 次活动连接有慢速定性滤纸5和医用纱布片6； 所述第二盖体3的底壁的内表面依 次活动连 接有支撑物8和孔径在0.2 ‑0.45 μm微孔滤膜7； 所述第一盖体2与所述透明管1的端部螺纹连 接； 所述第二盖体3与所述透明管1的另一端部 螺纹连接 。 [0005]所述支撑物8优选医用纱布、 无 纺布或滤纸。 [0006]一种质粒提取 方法， 包括如下步骤： [0007]1)过夜摇菌； [0008]2)使用权利要求1的质粒提取器， 质粒提取器包括有两端部设置有外螺纹的透明 管1、 侧壁内表面设置有内螺纹的第一盖体2和侧壁内表 面设置有内螺纹的第二盖体3； 贯穿 第一盖体2的顶壁设置有第一连接管4； 贯穿第二盖体3的底壁设置有第二连接管9； 所述第 一盖体2的顶 壁的内表 面依次活动连接有慢速定性滤纸5和医用纱布片 6； 所述第二盖体3的 底壁的内表面依次活动连接有支撑物8和孔径在0.2 ‑0.45 μm微孔滤膜7； 所述第一盖体2与 所述透明管1的端部 螺纹连接； 所述第二盖体3与所述透明管1的另一端部 螺纹连接； [0009]3)旋下第一盖体2， 将步骤1)获得的菌液加入透明管； 将所述第二连接管9插入核 酸提取真空纯化过滤系统吸附柱插孔， 抽滤， 细菌留在所述微孔滤膜7上， 继续抽干， 取下质 粒提取器； [0010]4)使用质粒提取试剂盒， 向透明管中加入溶液P1， 用移 液器抽打重悬微孔滤膜7上 的细菌； 加入 溶液P2,混匀， 使细菌裂解； 加入 溶液P3,混匀， 有白色絮状沉淀生 成； 将吸附柱 插入核酸提取真空纯化过 滤系统吸附柱插孔， 加入0.5mL平衡液BL， 平衡吸附柱， 抽干； [0011]5)将第一盖体2与所述透明管旋紧， 翻转透明管使第一盖体2在下方， 旋下第二盖 体3， 将第一盖体连接的第一连接管4插 入吸附柱上， 抽滤； 质粒保留在吸附柱的吸附膜上； [0012]6)取下质粒提取器， 用漂洗液P W对吸附柱进行两次漂洗， 去除吸附膜上的杂质； 将 吸附柱放入收集管后 再放于离心机中， 12000rpm离心2min； 在吸附柱内加 入50 μL洗脱缓冲说　明　书 1/3 页 3 CN 115093937 A 3