ICS 65.020.20 CCS B 16 22 吉林省 地方 标准 DB22/T 3601—2023 人参锈腐病菌分子检测 实时荧光定量 PCR 法 Detection of Ilyonectria robusta causing ginseng rusty root rot by quantitative real -time PCR 2023-12-28 发布 2024-02-01 实施 吉林省市场监督管理厅 发布 DB22/T 3601 —2023 I 前言 本文件按照 GB/T 1.1 —2020《标准化工作导则 第 1 部分：标准化文件的结构和起草规则》的 规定起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由 吉林省农业农村厅提出并归口 。 本文件起草单位： 吉林农业大学、吉林参王植保科技有限公司。 本文件主要起草人： 陈长卿、姜云、高洁、徐怀友、卢宝慧、杨丽娜、姜伊琳。 DB22/T 3601 —2023 1 人参锈腐病菌 分子检测 实时荧光定量 PCR法 1 范围 本文件确立了人参锈腐病菌实时荧光定量 PCR 分子检测方法，给出了实时荧光定量 PCR 检测原 理，规定了试剂和材料、仪器设备、样品采集与制备、分析步骤、结果判定、废弃物处理和防止污染的 措施。 本文件适用于人参根和土壤中锈腐病菌的实时荧光定量 PCR 分子检测。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 28067 甘蔗黄叶病毒实时荧光 RT-PCR 检测方法 3 术语和定义 GB/T 28067 界定的以及下列术语和定义适用于本文件。 人参锈腐病 ginseng rusty root rot 一种主要由强壮土赤壳菌（ Ilyonectria robusta ）侵染人参根部导致的土传病害 。 实时荧光定量 PCR 法 quantitative real -time PCR 一种在 DNA 扩增反应中，以荧光化学物质测定每次聚合酶链式反应（ PCR）循环后产物总量的方 法。 Ct值 cycle threshold 每个反应管内的荧光信号达到设定的阈值时所经历的循环数。 [来源：GB/T 28067 —2011，2.3] 4 原理 根据人参锈腐病强壮土赤壳菌 I. robusta 组蛋白 Histone 基因的保守序列设计一对特异性引物 进行 PCR 扩增反应。利用荧光信号伴随目的 PCR 产物的增加而增强的原理 ，收集 PCR 扩增过程的荧 光信号值。随着 PCR 扩增反应的进行， Ct 值和该模板的起始拷贝数存在线性关系，根据 Ct 值判断 供试样品是否含有人参锈腐病强壮土赤壳菌。 5 试剂和材料