ICS 65. 020. 01 CCS B 05 DB65 新疆维吾尔自治区地方标准 DB 65/T 46712023 土壤中棉花黄萎病菌检测与分离鉴定规程 Code of practice for detection and isolation identification of cotton Verticillium dahliae in soil 地方标准信息服务平台 2023-07-20 发布 2023-09－20实施 新疆维吾尔自治区市场监督管理局 发布 地方标准信息服务平台 DB 65/T4671—2023 目 次 前言 范围 2 规范性引用文件 3 术语和定义 4 原理. 5仪器和试剂. 5.1仪器设备. 5.2试剂与材料.. 5.3培养基的配制 6土壤采集与处理 6.1土壤采集. 6.2土壤处理 7 病菌数量检测。 8病菌分离鉴定 8.1病菌分离纯化 8.2分子生物学鉴定 9标本及资料保存. 9.1样品保存， 9.2资料保存 附录A（资料性） 土壤样品处理流程. .4 附录B（资料性） 溶液的配制 附录C（资料性） 选择性培养基上黄萎病菌菌落形态。 附录D（资料性） PDA培养基上棉花黄萎病菌菌落形态 附录E（资料性） PCR反应体系与反应条件 8 急服务平台 附录F（资料性） 记录表格 地方标准信息服务平台 DB 65/T4671——2023 前．言 本文件按照GB/T1.1一 -2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规 定起草。 本文件由新疆维吾尔自治区农业农村厅提出。 本文件由新疆维吾尔自治区农业农村厅归口并组织实施。 本文件起草单位：新疆维吾尔自治区植物保护站、新疆农业科学院植物保护研究所。 本文件主要起草人：刘海洋、王惠卿、王伟、张仁福、魏新政、姚举、努尔孜亚·亚力买买提、丁 瑞丰、罗文芳。 本文件实施应用中的疑问，请咨询新疆维吾尔自治区植物保护站。 本文件的修改意见建议，请反馈至新疆维吾尔自治区农业农村厅（乌鲁木齐市胜利路157号），新 疆维吾尔自治区植物保护站（乌鲁木齐市胜利路157号），新疆维吾尔自治区市场监督管理局（乌鲁木 齐市新华南路167号）。 新维吾尔自治区农业农村厅联系电话：0991-2878226；传真：0991-8551484；邮编：830000 新疆维吾尔自治区植物保护站联系电话：0991-5508625；传真：0991-5856274；邮编：830000 新疆维吾尔自治区市场监督管理局联系电话：0991-2817197；传真：0991-2311250；邮编： 830004 地方标准信息服务平台 III 地方标准信息服务平台 DB65/T4671—2023 土壤中棉花黄萎病菌检测与分离鉴定规程 1范围 本文件规定了土壤中棉花黄萎病菌检测与分离鉴定的原理、仪器和试剂、土壤采集与处理、病菌数 量检测、病菌分离鉴定、标本及材料保存的要求。 本文件适用于棉田土壤中棉花黄萎病菌无性态阶段的检测、分离与鉴定。 2规范性引用文件 本文件没有规范性引用文件。 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3. 1 选择性培养基selectivemedium 进行植物病原菌分离培养时，为促进目标菌落的形成，抑制其它杂菌的生长，在培养基中添加不同 的碳源、氮源以及抑制性物质配制成具有选择生长能力的培养基。 3.2 棉花黄萎病菌verticilliumdahliae 棉花黄萎病菌无性态属丝孢纲（Hyphomycetes）、丝孢目（Hyphomycetsles）、轮枝菌科 （Verticilliaceae）、轮枝菌属（Verticilliu)。主要经由种子、土壤、病残体、雨水和灌溉水等进 行传播。 3.3 微菌核microsclerotium 棉花黄萎病菌生长过程中，由单一或数条菌丝体膨大、胞壁增厚，向各个方向生长扩展并不断聚集 形成的暗褐色或黑色较为坚硬的不规则休眠体。 3. 4 分生孢子梗conidiophore 在直立的分生孢子梗每节基部膨大处轮生若干个小梗，通常由2层～4层轮生小梗及上部的顶枝构 息服务 成。 4原理 土壤是棉花黄萎病菌的主要生存场所之一，土壤环境内含有大量的微生物，首先利用水筛法处理土 壤得到土壤悬浊液，然后将土壤悬浊液涂布于选择性培养基，待目标菌落生长后，挑取典型黄萎病菌单 菌落的菌块，捣碎后利用梯度稀释法分离、纯化目标病原菌，对其进行形态特征和分子生物学鉴定。流 程图见附录A。 5仪器和试剂 1