本文是学习GB-T 5513-2019 粮油检验 粮食中还原糖和非还原糖测定. 而整理的学习笔记,分享出来希望更多人受益,如果存在侵权请及时联系我们
本标准规定了粮食中还原糖和非还原糖测定的术语和定义以及铁氰化钾法和费林试剂法两种方法
测定还原糖和非还原糖的原理、试剂、仪器和用具、操作步骤、结果计算及重复性。
本标准适用于商品粮食中还原糖和非还原糖含量的测定,其中铁氰化钾法主要适用于小麦粉还原
糖和非还原糖的测定。
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文
件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T 601 化学试剂 标准滴定溶液的制备
GB/T 5490 粮油检验 一般规则
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
下列术语和定义适用于本文件。
3.1
还原糖 reduced sugar
分子结构中含有游离半缩醛羟基或半缩酮羟基的糖。
3.2
非还原糖 non-reduced sugar
分子结构中不含游离半缩醛羟基或半缩酮羟基的糖。
还原糖在碱性溶液中将铁氰化钾还原为亚铁氰化钾,本身被氧化为相应的糖酸。过量的铁氰化钾
在乙酸的存在下,与碘化钾作用析出碘,析出的碘以硫代硫酸钠标准溶液滴定。通过计算氧化还原糖时
所用去的铁氰化钾的量,查经验表得试样中还原糖的百分含量。
除非另有说明,本标准仅使用确认为分析纯的试剂。
4.2.1 水:符合 GB/T 6682 中三级水的要求。
4.2.3 乙酸缓冲液:将3.0 mL 冰乙酸、6.8 g 无水乙酸钠和4.5 mL
浓硫酸混合溶解,然后用水稀释至
GB/T 5513—2019
4.2.4 12%钨酸钠溶液:将12.0 g 钨酸钠溶于100 mL 水中。
4.2.5 0.1 mol/L碱性铁氰化钾溶液:称取32.9 g 铁氰化钾与44.0 g
碳酸钠溶于1000 mL 水中。
4.2.6 乙酸盐溶液:将70 g 氯化钾和40 g 硫酸锌溶于750 mL 水中,然后缓慢加入200 mL 冰乙酸,用 水稀释至1000 mL, 混匀。
4.2.7 氢氧化钠饱和溶液:称取120 g 氢氧化钠,加100 mL
水,振摇使之溶解成饱和溶液,冷却后置于
聚乙烯塑料瓶中,密塞,放置数日,澄清后备用。
4.2.8 10%碘化钾溶液:称取10 g 碘化钾溶于100 mL
水中,再加1滴饱和氢氧化钠溶液。
4.2.9 1%淀粉溶液:称取1 g 可溶性淀粉,用少量水润湿调和后,缓慢倒入100
mL 沸水中,继续煮沸 直至溶液透明。
4.2.10 0.1 mol/L 硫代硫酸钠标准滴定溶液:按 GB/T601 配制与标定。
4.3.1 分析天平:分度值0.001 g。
4.3.5 量筒:25 mL、50 mL。
4.3.8 试管:直径1.8 cm~2.0 cm,高约18 cm。
4.3.9 磨口具塞锥形瓶:100 mL。
4.3.10 锥形瓶:100 mL。
4.3.11 微量滴定管:5mL 或10 mL。
4.3.12 12.5 mm 中速定性滤纸。
取混合均匀的试样,用粉碎磨(4.3.3)粉碎,使试样90%通过孔径0.27 mm(60
目)筛,合并筛上、筛
下物,充分混合,保存备用。
精确称取试样(4.4.1)5.675 g 于100 mL
磨口具塞锥形瓶(4.3.9)中。倾斜锥形瓶使所有试样集中 于一侧,用5 mL95%
乙醇(4.2.2)浸湿全部试样,再加入50 mL
乙酸缓冲液(4.2.3),振荡摇匀后立即加 入 2 mL12%
钨酸钠溶液(4.2.4),在振荡器(4.3.2)上混合振摇5 min。
将混合液过滤,弃去最初几滴滤
液,收集滤液于干净锥形瓶(4.3.10)中,此滤液即为样品测定液。另取一锥形瓶(4.3.10)不加试样,同上
操作,滤液即为空白液。
4.4.3.1 氧化:用移液管(4.3.6 于试管(4.3.8)中,再精确加入5 mL0.1 mol/L 碱性铁氰化钾溶液(4 .2 .
5),混合后立即将试管放入沸水浴中(4 . 3 .4),并确保试管内液面低于沸水液面
3 cm~4 cm,加热20 min 后取出,立即用冷水冷却。
4.4.3.2 滴定:将试管内容物倾入100 mL
锥形瓶(4.3.10)中,用25 mL 乙酸盐溶液(4.2.6)荡洗试管,
GB/T 5513—2019
内容物一并倾入锥形瓶中,加入5 mL10% 碘化钾溶液(4.2.8),混匀后,立即用0.1
mol/L 硫代硫酸钠 标准滴定溶液(4.2. 10)滴定至淡黄色,再加1 mL1%
淀粉溶液(4.2.9),继续滴定至蓝色消失,记下消耗
的硫代硫酸钠溶液体积(V₁)。
4.4.3.3 空白试验:吸取空白液5 mL,
代替样品液按4.4.3. 1和4.4.3.2操作,记下消耗的硫代硫酸钠标
准滴定溶液(4.2.10)体积(V 。)。
分别吸取样品液(4.4.2)及空白液(4.4.2)各5 mL
于试管中,先在剧烈沸腾的水浴中加热15 min
(样品液中非还原糖转化为还原糖),取出迅速冷却后,加入0. 1 mol/L
碱性铁氰化钾溶液(4.2.5)5 mL, 混匀后,再放入沸腾水浴中继续加热20 min,
取出迅速冷却后,立即按4.4.3.2方法进行滴定,分别记下
滴定样品液及空白液消耗硫代硫酸钠标准滴定溶液(4.2. 10)的体积(V′ 、V 。')
根据氧化样品液中还原糖所需0. 1 mol/L 铁氰化钾溶液的体积查附录 A 中 表
A.1, 即可查得试样
中还原糖(以麦芽糖计)的质量分数。铁氰化钾溶液体积(V) 按式(1)计算:
style="width:2.39996in;height:0.63338in" /> (1)
式 中 :
V₃—— 氧化样品液中还原糖所需0. 1 mol/L
铁氰化钾溶液的体积,单位为毫升(mL);
V。——滴定空白液消耗0. 1 mol/L 硫代硫酸钠溶液的体积,单位为毫升(mL);
V₁— 滴定样品液消耗0 . 1 mol/L 硫代硫酸钠溶液的体积,单位为毫升(mL);
C — 硫代硫酸钠标准滴定溶液浓度,单位为摩尔每升(mol/L)。
计算结果保留小数点后两位。
测定结果不符合重复性要求时,应按GB/T 5490 的规定重新测定,计算结果。
0.1 mol/L 铁氰化钾体积与还原糖含量对照可查表 A. 1。
注:还原糖含量以麦芽糖计。
非还原糖含量根据氧化样品液中总还原糖所需的0. 1 mol/L
铁氰化钾溶液的体积(V), 减去氧化
样品液中还原糖所需的铁氰化钾溶液体积(V³), 最后再根据 V₄—V 。
的结果查表 A.2, 即可查得试样中
非还原糖(以蔗糖计)的质量分数。铁氰化钾溶液的体积(V₄) 按式(2)计算:
style="width:2.58656in;height:0.68002in" /> ……………………………… (2)
式 中 :
V,— 氧化样品液中总还原糖所需0. 1 mol/L
铁氰化钾溶液体积,单位为毫升(mL);
V 。'— 滴定空白液消耗硫代硫酸钠溶液体积,单位为毫升(mL);
Vi'— 滴定样品液消耗硫代硫酸钠溶液体积,单位为毫升(mL);
c —— 硫代硫酸钠标准滴定溶液浓度,单位为摩尔每升(mol/L)。
计算结果保留小数点后两位。
测定结果不符合重复性要求时,应按 GB/T 5490 的规定重新测定,计算结果。
0.1 mol/L 铁氰化钾体积与非还原糖含量对照可查表 A.2。
注:非还原糖含量以蔗糖计。
GB/T 5513—2019
同一实验室,由同一操作者使用相同设备,按照相同的测试方法,并在短时间内,对同一被试对象,
相互独立进行测试获得的两次独立测试结果差的绝对值不大于这两个测定值的算术平均值的5%。如
果两次测定结果符合要求,则取结果的平均值。
还原糖将费林试剂中的铜盐还原为氧化亚铜,加入过量的酸性硫酸铁溶液后,氧化亚铜被氧化为铜
盐而溶解,而硫酸铁被还原为硫酸亚铁。高锰酸钾标准溶液滴定氧化作用后生成亚铁盐。根据高锰酸
钾标准溶液消耗量,计算氧化亚铜含量,再查表得到还原糖的量。
5.2.1 费林试剂甲液:取五水硫酸铜34.639g, 加适量水溶解,加浓硫酸0.5
mL, 再加水至500 mL, 用 精制石棉过滤。
5.2.2 费林试剂乙液:取酒石酸钾钠173 g 与氢氧化钠50 g,
加适量水溶解,稀释至500 mL, 用精制石 棉过滤,贮存于具橡皮塞的玻璃瓶内。
5.2.3 3 mol/L 盐酸:取浓盐酸25 mL, 加水至100 mL。
5.2.4 精制石棉:先用3 mol/L 盐酸(5.2.3)将石棉浸泡2 d~3d
后,用水洗净。再加10%氢氧化钠溶 液浸泡2 d~3d,
倾去溶液,用热费林试剂乙液(5.2.2)浸泡2 h,用水洗净。再用3 mol/L
盐酸(5.2.3) 浸泡2
h,用水洗至中性,使之成为微细的软纤维,用水浸泡贮存于玻璃瓶内,作填充古氏坩埚用。
5.2.5 0.1 mol/L高锰酸钾标准滴定溶液:按 GB/T601 进行配制和标定。
5.2.6 1.0 mol/L氢氧化钠溶液:称取氢氧化钠4.0 g,加水溶解至100 mL。
5.2.7 硫酸铁溶液:称取硫酸铁50 g,加水200 mL 溶解,然后慢慢加入浓硫酸100
mL, 冷却后加水至
5.2.8 6 mol/L盐酸:取浓盐酸100 mL, 加水至200 mL。
5.2.9 甲基红指示液:0.1%甲基红乙醇溶液。
5.2.10 20%氢氧化钠溶液:取氢氧化钠20.0 g,加水溶解至100 mL。
5.3.2 恒温振荡器(温度控制45℃)。
5.3.10 微量滴定管:5 mL 或10 mL。
5.3.11 容量瓶:250 mL 、100 mL。
GB/T 5513—2019
取混合均匀的试样,用粉碎磨(5.3.3)粉碎,使试样90%通过孔径0.27 mm(60
目)筛,合并筛上、筛
下物,充分混合,保存备用。
称量试样(5.4.1)20 g, 精确至0.01 g, 置于250mL 容量瓶(5.3.11)中,加水200
mL, 在45℃下混合 振 荡 1 h, 冷却后加水定容并摇匀。静置后,取上层清液200
mL 置于另一250 mL 容量瓶中,加费林试 剂甲液(5.2.1)10 mL 和1.0 mol/L
氢氧化钠溶液(5.2.6)4 mL, 摇匀后定容,然后静置30 min 。 用干燥
滤纸过滤,弃去初滤液,其余滤液供测定还原糖和非还原糖用。
移取试样溶液50 mL 于400 mL
烧杯(5.3.8)中,加入费林试剂甲液、乙液(5.2.1、5.2.2)各25 mL,
加盖表面皿,置电炉上加热,并在4 min 内沸腾,再煮沸2 min,
趁热用铺有石棉的古氏坩埚(5.3.4)[或 G4
垂融坩埚(5.3.5)]抽滤(5.3.6、5.3.7),并用60℃热水洗涤烧杯和沉淀,至洗液不呈碱性为止。向古
氏坩埚(5.3.4)[或G4 垂融坩埚(5.3.5)]中加入硫酸铁溶液(5.2.7)和水各25
mL, 用玻璃棒搅拌,使氧化
亚铜完全溶解,用前面使用过的烧杯(5.3.8)收集溶液,以0.1 mol/L
高锰酸钾标准滴定溶液(5.2.5)滴
定至微红色。同时取水50 mL, 加费林试剂甲液、乙液(5.2.1、5.2.2)各25 mL,
做试剂空白试验。
注:煮沸后的溶液如不呈蓝色,表示糖量过高,可减少试样量,重新测定。
吸取已制备的样品液(5.4.2)50 mL, 转移至100 mL 容量瓶(5.3.11)中,加6
mol/L 盐酸(5.2.8) 5mL, 在68℃~70℃水浴中加热15 min,
冷却后加甲基红指示液(5.2.9)2滴,用20%氢氧化钠溶液
(5.2.10)中和,加水至刻度,混匀,然后按5.4.3测定样品液中总还原糖。
相当于试样中还原糖质量的氧化亚铜质量按式(3)计算:
X=(V-V 。)×c×71.54 …… ……………………… (3)
式中:
X — 相当于试样中还原糖质量的氧化亚铜的质量,单位为毫克(mg);
V — 试样消耗高锰酸钾标准溶液的体积,单位为毫升(mL);
V 。 — 试样空白消耗高锰酸钾标准溶液的体积,单位为毫升(mL);
c — 高锰酸钾标准溶液的浓度,单位为摩尔每升(mol/L);
71.54—— 1 mol/L 高锰酸钾标准溶液1 mL 相当于氧化亚铜的毫克数。
由所得的氧化亚铜质量,按表 A.3 查出相当的还原糖(以葡萄糖计)的质量。
还原糖干基含量(Y) 以质量分数(%)表示,按式(4)计算:
style="width:2.49342in;height:0.64658in" /> (4)
式中:
mi— 由 表 A.3 中查得的还原糖(以葡萄糖计)的质量,单位为毫克(mg);
GB/T 5513—2019
m — 试样质量,单位为克(g);
W— 试样水分含量,%。
计算结果保留小数点后两位。
测定结果不符合重复性要求时,应按 GB/T 5490 的规定重新测定,计算结果。
总非还原糖干基含量Z (以蔗糖计),以质量分数(%)表示,按式(5)计算:
style="width:4.6599in;height:0.66in" /> (5)
式中:
m₂—— 转化后测得的还原糖(以葡萄糖计)质量,单位为毫克(mg);
m - 原测定还原糖时试样质量,单位为克(g);
V — 转化后用于测定还原糖的样品液的体积,单位为毫升(mL);
— 试样水分含量,%;
Y — 样品中还原糖质量分数,%;
0.95——还原糖(以葡萄糖计)换算为蔗糖的因数。
计算结果保留小数点后两位。
测定结果不符合重复性要求时,应按GB/T 5490 的规定重新测定,计算结果。
同一实验室,由同一操作者使用相同设备,按照相同的测试方法,并在短时间内,对同一被试对象,
相互独立进行测试获得的两次独立测试结果差的绝对值不大于这两个测定值的算术平均值的5%,如
果两次测定结果符合要求,则取结果的平均值。
GB/T 5513—2019
含量对照见表 A.1~ 表 A.3。
表 A.1 0.1
(资料性附录)
含量对照表
mol/L 铁氰化钾体积与还原糖含量对照表
0.1 mol/L
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0.1 mol/L K3Fe(CN)。
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0.1 mol/L K3Fe(CN)。
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0.1 mol/L K;Fe(CN)。
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表 A.2 0.1 mol/L 铁氰化钾体积与非还原糖含量对照表
0.1 mol/L
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GB/T 5513—2019
表 A.3 相当于氧化亚铜质量的葡萄糖、果糖、转化糖质量
单位为毫克
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GB/T 5513—2019
表 A.3 (续) 单位为毫克
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单位为毫克
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GB/T 5513—2019
表 A.3 ( 续) 单位为毫克
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